[发明专利]一种脂必妥片中桔霉素的检测方法

说明书

技术领域

本发明提供一种桔霉素的检测方法，具体的说是一种脂必妥片中桔霉素的检测方法；属于化学检测技术领域。

背景技术

桔霉素(citrinin)是1931年首次从青霉菌Penicillium citrinum中分离得到。其分子式为C₁₃H₁₄O₅，分子量为250.25。桔霉素有一定的肾毒性和肝毒性，能致畸、引发肿瘤及诱发突变。而红曲是中国传统药材，是用特有的红曲霉菌在大米中培养发酵而成。因某些红曲霉菌株能产生具有抑制胆固醇生物合成的他汀类物质，因而中药红曲被开发为降血脂的脂必妥片和保健食品。在1995年法国学者Blanc等首次发现了红曲产品中含有桔霉素后，国外已将桔霉素作为食品污染的严格控制指标。而在中国，中国药典尚未将桔霉素作为含红曲中成药的控制指标。

对于脂必妥片——脂必妥片有文献记载用RP-HPLC法测定其桔霉素含量，而在食品、保健食品中也有桔霉素的检测方法：薄层层析法、荧光分光光度法、高效液相色谱法等。

发明内容

针对上述不足，本发明的目的是提供一种灵敏度高，分析时间短的脂必妥片中桔霉素的检测方法桔霉素的方法。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：

一种脂必妥片中桔霉素的检测方法，所述的检测方法包括下述步骤：1)制备标准溶液；：1)制备标准溶液；2)取脂必妥片0.5g粉碎，置10ml锥形瓶中，加3ml 1％磷酸-甲醇溶液，60℃加热回流60min，冷却，过滤，滤液转移至25ml容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀后过滤，以1ml/min流速通过分别以3ml乙醇和3ml水活化的HLB固相萃取柱，用5ml水淋洗，弃去，再用5ml乙醇洗脱收集洗脱液，洗脱液于40℃下氮吹至近干，精密加入1ml乙醇溶解，用0.22μm有机滤膜过滤，即得待测样品，将待测样品上Agilent1295-6550C三重四级杆液相质谱联用仪检测。

进一步的，上述的一种脂必妥片中桔霉素的检测方法，所述的制备标准溶液包括下述步骤：

1)标准溶液的制备

标准储备液：精密称取标准物质5mg，置5ml容量瓶中，加乙醇溶解并至刻度，使成浓度为1mg/ml；

标准稀释液：精密吸取标准溶液0.2ml，置50ml的容量瓶中，加乙醇稀释至刻度，使成浓度为2μg/ml1；

标准工作曲线：取标准稀释液液适量加乙醇，分别配制成浓度为0.01、2、5、5、20ng/ml标准工作液。

进一步的上述的一种脂必妥片中桔霉素的检测方法，所述的液相色谱与质谱条件色谱柱：Agilent poroshell 120EC-C18，3.0×50mm 2.7micron，1.8μm；流动相A为0.2％磷酸，流动相B为甲醇，采用梯度洗脱程序如下：0-3min，A、75-5％，B、25-95％；3-5.5min，A、5％，B、95％；5.5.-5.6min，A、75％，B、25％；流速0.2ml/min；柱温40℃；进样量2μl；电喷雾源ESI，正离子方式，选择多反应监测MRM，载气温度：150℃，载气流量：15L/min，雾 化器压力40psi，鞘气温度300℃，鞘气流量：12L/min，毛细管电压3500V，定性定量离子：母离子m/z＝251.2，子离子m/z233.2和m/z 205.2，碰撞能量分别为5V和20V。

本文建立了含红曲脂必妥片的桔霉素液相色谱-串联质谱测定，本方法在6min内完成了对该物质的分析测定，在保证定性定量准确的情况下，实现了高灵敏的分析，并在提取过程中减少了甲苯等有毒试剂的使用，具有高效、环保等特点，可为脂必妥片中的桔霉素监测提供技术支撑。

附图说明

图1是2μg/ml桔霉素标准溶液多反应监测图。

图2是空白样品的多反应监测图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式，对本发明的权利要求做进一步的详细说明，但不构成对本发明的任何限制，任何在本发明权利要求保护范围所做的有限次的修改，仍在本发明的权利要求保护范围之内。

实施例1

1材料

1.1仪器