[发明专利]结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法在审
申请号: | 201610235756.3 | 申请日: | 2016-04-15 |
公开(公告)号: | CN105754948A | 公开(公告)日: | 2016-07-13 |
发明(设计)人: | 郑晓冬;徐冬冬 | 申请(专利权)人: | 浙江大学 |
主分类号: | C12N5/09 | 分类号: | C12N5/09 |
代理公司: | 杭州中成专利事务所有限公司 33212 | 代理人: | 金祺 |
地址: | 310058 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 结肠 癌细胞 体外 组织 培养 方法 | ||
1.结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法,其特征是依次进行如下步骤:
1)、中空纤维的灭菌:
将中空纤维切成2~4cm长的小段,浸泡于PBS缓冲溶液中,然后一同置于蒸汽高压灭菌锅灭菌20min;
待灭菌完毕,在超净台中取出中空纤维置于平皿上铺开风干;
2)、中空纤维预先铺被胶原:
首先将I型鼠尾胶原稀释配制成浓度为0.7~0.8mg/mL鼠尾胶原溶液,然后将上述鼠尾胶原溶液注满平躺状态下的步骤1)所得的灭菌后中空纤维的内腔;接着静置20~40min;
3)、将Caco-2细胞悬液计数后稀释到5×106cells/mL注入至步骤2)所得的中空纤维内腔,直至该中空纤维内腔充满Caco-2细胞悬液,置于37±0.2℃培养箱中,使用驱动装置使中空纤维沿轴向旋转,转速为转90度/小时,旋转时间为4h;
4)、旋转4h后,将培养有细胞的中空纤维置于培养板中,在培养板的每孔加入2~3mL培养基,将培养板放入37±0.2℃培养箱中进行培养;每1~2天更换一次培养基。
2.根据权利要求1所述的结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法,其特征是:
所述步骤4)中,培养板的每孔中设置2~3根中空纤维。
3.根据权利要求1或2所述的结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法,其特征是:所述中空纤维为PES中空纤维膜或PVDF中空纤维膜;
所述PES中空纤维膜为:孔径0.1μm,0.1MPa下纯水通量1000L/m2h,内/外径0.8/1.4mm;
所述PVDF中空纤维膜为:孔径0.2μm,0.1MPa下纯水通量800L/m2h,内/外径0.7/1.3mm。
4.根据权利要求3所述的结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法,其特征是:
所述步骤3)中使用步进电机驱动装置使中空纤维沿轴向旋转。
5.根据权利要求3所述的结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法,其特征是:
所述步骤4)中的培养基为:将DMEM基础培养基(高糖)与胎牛血清按照9:1的体积比混合,得培养基。
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