[发明专利]结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法

权利要求书

1.结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法，其特征是依次进行如下步骤：

1)、中空纤维的灭菌：

将中空纤维切成2～4cm长的小段，浸泡于PBS缓冲溶液中，然后一同置于蒸汽高压灭菌锅灭菌20min；

待灭菌完毕，在超净台中取出中空纤维置于平皿上铺开风干；

2)、中空纤维预先铺被胶原：

首先将I型鼠尾胶原稀释配制成浓度为0.7～0.8mg/mL鼠尾胶原溶液，然后将上述鼠尾胶原溶液注满平躺状态下的步骤1)所得的灭菌后中空纤维的内腔；接着静置20～40min；

3)、将Caco-2细胞悬液计数后稀释到5×10⁶cells/mL注入至步骤2)所得的中空纤维内腔，直至该中空纤维内腔充满Caco-2细胞悬液，置于37±0.2℃培养箱中，使用驱动装置使中空纤维沿轴向旋转，转速为转90度/小时，旋转时间为4h；

4)、旋转4h后，将培养有细胞的中空纤维置于培养板中，在培养板的每孔加入2～3mL培养基，将培养板放入37±0.2℃培养箱中进行培养；每1～2天更换一次培养基。

2.根据权利要求1所述的结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法，其特征是：

所述步骤4)中，培养板的每孔中设置2～3根中空纤维。

3.根据权利要求1或2所述的结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法，其特征是：所述中空纤维为PES中空纤维膜或PVDF中空纤维膜；

所述PES中空纤维膜为：孔径0.1μm，0.1MPa下纯水通量1000L/m²h，内/外径0.8/1.4mm；

所述PVDF中空纤维膜为：孔径0.2μm，0.1MPa下纯水通量800L/m²h，内/外径0.7/1.3mm。

4.根据权利要求3所述的结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法，其特征是：

所述步骤3)中使用步进电机驱动装置使中空纤维沿轴向旋转。

5.根据权利要求3所述的结肠癌细胞的体外拟组织化培养方法，其特征是：

所述步骤4)中的培养基为：将DMEM基础培养基(高糖)与胎牛血清按照9:1的体积比混合，得培养基。