[发明专利]专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法

说明书

技术领域

本发明涉及食品、保健品领域，具体涉及一种制备高纯度皮诺敛酸的方法。

背景技术

皮诺敛酸为全顺式5、9、12-十八碳三烯酸，它与地球上所有植物当中的不饱和 脂肪酸不同，它只存在于松籽油中，不仅能够降低胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)，升高 高密度脂蛋白(HDL)，而且还能抑制、消除其他不饱和脂肪酸对机体的不利影响，与 α-亚麻酸(9，12，15-十八碳三烯酸)、γ-亚麻酸(6，9，12-十八碳三烯酸)为同分异 构体。同时，目前最新研究表明，它还具有抗炎、解热、镇痛，对抗各种真菌、病毒 感染，促进中老年人排泄功能等作用。它被专家誉为洗血因子。鉴于皮诺敛酸的功效， 提取高纯度皮诺敛酸具有重要意义。

传统提取高纯度不饱和脂肪酸的步骤为：植物油→水解/酯交换→尿素包埋/冷冻/ 层析柱→分子蒸馏。专利201310194780.3一种松子油皮诺敛酸微胶囊及其制备方法中 所用的脂肪酸提纯方法步骤为：酯交换→尿素包埋→冷冻结晶，利用尿素包埋特点为 操作简单、便于工业化生产，但尿素包埋有效成分利用率低，提纯不彻底，废料中仍 残留较多的皮诺敛酸。对于稀缺的松子油来说造成很大的资源浪费；专利 201310363815α-亚麻酸的提取方法和专利200510107356纯度大于80％的α-亚麻酸的 生产工艺，均是采用水解、尿包、冷冻、蒸馏等步骤完成。

发明内容

本发明提供一种专一性酶法制备高纯度皮诺敛酸的方法，以解决传统高纯度皮诺 敛酸提取有效成分利用率低，产品得率低的问题。

本发明采取的技术方案是，包括下列步骤：

步骤一：松子油Sn-1,3专一性脂肪酶水解

将松子油、脂肪酶、溶剂搅拌混合均匀，在20℃-60℃条件下反应2-24小时；

步骤二：Sn-2单甘酯的分离

将步骤一反应的混合物真空回收溶剂后通过分子蒸馏，取重组分即得到Sn-2 皮诺敛酸单甘酯；

步骤三：皮诺敛酸单甘酯水解

单甘酯与碱溶液按1:1的摩尔质量比混合，30℃-60℃反应≥2小时，形成皮 诺敛酸盐与甘油，搅拌加入1摩尔比例的无机酸，水洗混合物弃下层、真空脱溶、 过滤后经分子蒸馏，取轻组分即得到高纯度皮诺敛酸产品。

所述步骤一的松子油要求酸值≤0.5KOHmg/g，过氧化值≤5meq/kg，皮诺敛 酸含量≥15％；

所述步骤一的Sn-1，3专一性脂肪酶包括Novozym(lipozyme)435、lipozyme TLIM、lipozymeRMIM或其混合物；

所述步骤一中的溶剂为含水1％-5％的三氯甲烷、异丙醇、乙酸乙酯或其混合 物；

所述步骤一中松子油、脂肪酶、溶剂按照下面比例混合，其中松子油和脂肪 酶以质量M计，溶剂以体积V计，质量g对应体积ml；

M_松子油：M_脂肪酶：V_溶剂＝1：0.01-0.1:1-10。

所述步骤二和步骤三分子蒸馏为一级薄膜蒸发加三级以上的短程蒸馏，薄膜 蒸发温度≥80℃且逐级升高；

所述步骤三中的碱溶液，碱溶液为NaOH、KOH、Ca(OH)₂等无机碱溶解于 水、甲醇、乙醇等极性溶剂中。无机酸包括硫酸、盐酸、磷酸、硝酸等。

本发明的有益效果是：

1、本发明解决了皮诺敛酸提纯繁琐步骤及酸碱污染的缺点；

2、本发明反应简单、环保、低温、解决了传统提取过程中繁琐步骤及高温 破坏皮诺敛酸有效成分的缺点。

3、本发明以含量为17％的松子油为原料，提取的含量为70％皮诺敛酸收率 达30％以上，最后的副产物中皮诺敛酸含量<1％，解决了尿素包埋法提取松子油 中皮诺敛酸利用率低的缺点；

具体实施方式

本发明以《食品化学》中描述的植物油Sn-2位为高不饱和脂肪酸为基础，以松 子油Sn-2脂肪酸成分分析为依据，选择性水解松子油Sn-1，3位饱和/单不饱和脂肪 酸得到高纯度皮诺敛酸单甘脂，再用化学水解单甘酯得到高纯度皮诺敛酸产品(反应 方程式如下)。

其中，松子油来自吉林派诺生物技术股份有限公司。

实施例1：