[发明专利]一种改良的蛋白质印迹方法在审
| 申请号： | 201610237608.5 | 申请日： | 2016-04-15 |
| 公开（公告）号： | CN105675888A | 公开（公告）日： | 2016-06-15 |
| 发明（设计）人： | 徐义;刘书磊;韩化敏 | 申请（专利权）人： | 拜西欧斯（北京）生物技术有限公司 |
| 主分类号： | G01N33/68 | 分类号： | G01N33/68 |
| 代理公司： | 北京安信方达知识产权代理有限公司 11262 | 代理人： | 李平;苏蕾 |
| 地址： | 100070 北京市丰*** | 国省代码： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 改良 蛋白质 印迹 方法 | ||
1.一种改良的蛋白质印迹方法，包括以下步骤：
(1)目标蛋白质的SDA-PAGE电泳分离；
(2)转膜；
(3)酶免疫定位；
(4)蛋白信号检测；
其中，步骤(3)所述的酶免疫反应是膜上的目标蛋白质先后分别与特异 性一抗和酶标二抗发生反应，所述酶标二抗是偶联酶标记物的特异性一抗的 抗体；并且所述酶标二抗的酶标记与显色底物反应产物产生荧光，所述步骤 (4)是采用活体生物成像装置检测步骤(3)产生的荧光信号。
2.根据权利要求1所述的蛋白质印迹方法，其中，所述步骤(4)中采 用活体生物成像装置检测的曝光时间为0.025s～2.5s，优选0.25s。
3.根据权利要求1所述的蛋白质印迹方法，其中，所述酶标记物选自辣 根过氧化物酶和碱性磷酸酶、葡萄糖氧化酶、半乳糖苷酶β中的一种。
4.根据权利要求1所述的蛋白质印迹方法，其中，所述酶标记物是辣根 过氧化物酶。
5.根据权利要求1所述的蛋白质印迹方法，其中，所述与酶标二抗上偶 联的酶标记的反应底物包括但不限于DAB、4-CN、CN/DAB、AEC、TMB和 ECL。
6.根据权利要求1所述的蛋白质印迹方法，其中，所述酶标二抗的偶联 酶标记的反应物底物是ECL。
7.根据权利要求1所述的蛋白质印迹方法，其中，所述目标蛋白质包括 动物蛋白。
8.根据权利要求1所述的蛋白质印迹方法，其中，步骤(2)中所述转 膜是将在凝胶中已经分离的条带转移至固相膜上，所述固相膜选自硝酸纤维 素膜(NC)和PVDF膜中的一种。
9.根据权利要求1所述的蛋白质印迹方法，其中，步骤(4)所述的活体 生物成像装置为荧光成像装置，优选小动物活体成像仪。
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