[发明专利]检测利巴韦林的酶联免疫试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种利巴韦林酶联免疫检测试剂盒的制备方法，其中包括制备包被有包被原的酶标板、利巴韦林标准品溶液、酶标抗体、底物显色液、终止液、洗涤液、复溶液，所述包被原为利巴韦林偶联抗原，所述酶标抗体为酶标记的利巴韦林抗体，所述利巴韦林偶联抗原为利巴韦林半抗原与载体蛋白的偶联物，所述利巴韦林半抗原的制备方法主要包括如下步骤：

(1)取(9ci)-5-硝基-1H-1,2,4-噻唑-3-羧酰胺5g，加β-D-呋喃核糖-1,2,3,5-四乙酸酯3.26g，加DMSO溶解，加双(对硝基苯基)磷酸酯1.2g，油浴加热，170℃反应2h；停止反应，加水，乙酸乙酯萃取，蒸干，上硅胶柱，石油醚与乙酸乙酯的体积比是2：1，洗脱分离，得到中间体a 4.15g；

(2)取中间体a加氢氧化钠水溶液溶解，60℃反应2h，停止反应，中和，旋蒸，蒸干，加乙醇重结晶，得到硝基利巴韦林2.11g；

(3)取硝基利巴韦林2.1g，加甲醇溶解，加催化量钯碳，加氢气，室温搅拌6h，检测，原料反应完全，抽滤除去钯碳，旋蒸蒸干，得到油状物，1,2-二氯乙烷重结晶得到氨基利巴韦林半抗原产物1.21g。

2.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清白蛋白、鼠血清蛋白、兔血清蛋白、甲状腺蛋白、卵清蛋白、血蓝蛋白或人血清白蛋白。

3.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于：所述的利巴韦林特异性抗体为利巴韦林药物单克隆抗体。

4.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于所述酶标记物的标记酶为辣根过氧化物酶；酶标抗体是采用过碘酸钠法将标记酶与抗体偶联得到。

5.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于：所述底物显色液A液为过氧化脲溶液，底物显色液B液为四甲基联苯胺溶液，所述的终止液为1～2mol/L的硫酸溶液。

6.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于：所述洗涤液为含1％吐温-20的0.1～0.3mol/L pH7.4磷酸盐缓冲液。

7.如权利要求1所述试剂盒的制备方法，其特征在于：所述标准品溶液浓度分别为0μg/L、1μg/L、3μg/L、9μg/L、27μg/L、81μg/L。

8.如权利要求1-7任一项所述的利巴韦林酶联免疫检测试剂盒检测样本中利巴韦林残留的方法，主要步骤包括：

1)将待测样本进行前处理，得到待测样本溶液；

2)用权利要求1-7任一项所述的利巴韦林酶联免疫检测试剂盒检测待测样本溶液；

3)分析检测结果。