[发明专利]一种造血干细胞体外扩增培养的无血清培养基及其应用

说明书

技术领域

本发明属于细胞生物学、分子生物学和医学领域的研究领域，涉及一种造血干细 胞体外扩增培养的无血清培养基，更具体地说，涉及用于造血干细胞体外扩增培养的 无血清培养基及其应用。

背景技术

造血干细胞(hematopoieticstemcell，HSC)是指体内尚未发育成熟并且负责生成 所有各系血细胞的最原始的细胞群。HSC是多功能干细胞，医学上称其为“万能细胞”。 造血干细胞有高度自我更新能力和多种分化潜能，可产生所有成熟的血细胞，如红细 胞、白细胞、血小板和淋巴细胞等。HSC是一种不均一、不成熟造血前体细胞，在生 命过程中能重建整个造血系统，具有向B细胞和粒细胞两种途径分化，并且有维持长 期造血的功能。近年来，HSC越来越多地被应用于临床治疗血液系统恶性肿瘤、实体 瘤、骨髓衰竭性疾病及一些先天性疾病等，在儿科的血液病、肿瘤、遗传病的治疗中 也表现出一定的应用前景。临床发现HSCT时造血干细胞的数量与移植后造血和免疫 功能的重建有密切关系，并且大剂量的造血干细胞的输注利于供者造血干细胞在受体 内的植入。所以在HSC用于治疗时，也面临着一个严峻的问题：没有足够多的HSC用 于移植。

HSC进行体外扩增培养是一个很好的解决方法，同时也是一项极具挑战的技术， 基于以下几种原因：①HSC的体外扩增要求保持持续的自我更新能力的同时，也在扩 增中阻止其分化；但是，关于调节HSC的自我更新和阻止HSC扩增的生理学机制的 认识有限；②扩增干细胞的数量与移植的成功率密切相关。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于培养细胞的无血清培养基。

本发明提供的用于培养细胞的无血清培养基包括重组人胰岛素、重组人转铁蛋 白、重组人血白蛋白、β-巯基乙醇、乙醇胺、胆固醇、亚油酸和油酸。

上述无血清培养基中，所述重组人胰岛素、所述重组人转铁蛋白和所述重组人血 白蛋白均指能通过基因工程手段进行体外表达得到的，是能够重复人工制备的。

上述无血清培养基中，

所述重组人胰岛素、所述重组人转铁蛋白、所述重组人血白蛋白、所述β-巯基乙 醇、所述乙醇胺、所述胆固醇、所述亚油酸和所述油酸的质量比为5-30：20-80：50-300： 10-100：1-10：1-10：0.1-5：1.5。

上述无血清培养基中，

所述重组人胰岛素、所述重组人转铁蛋白、所述重组人血白蛋白、所述β-巯基乙 醇、所述乙醇胺、所述胆固醇、所述亚油酸和所述油酸的质量比为 10:50:100:40:5:5:1:1.5。

上述无血清培养基中，

所述培养基还包括基础培养基、L-谷氨酰胺、干细胞因子、白细胞介素3、白细 胞介素6、血小板生成素、促红细胞生成素、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和粒细胞 集落刺激因子；

所述基础培养基为细胞基础培养基；所述细胞基础培养基具体为IMDM基础培养 基。

所述培养基由所述IMDM基础培养基、所述重组人胰岛素、所述重组人转铁蛋白、 所述重组人血白蛋白、所述β-巯基乙醇、所述乙醇胺、所述胆固醇、所述亚油酸、所 述油酸、所述L-谷氨酰胺、所述干细胞因子、所述白细胞介素3、所述白细胞介素6、 所述血小板生成素、所述促红细胞生成素、所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和所述 粒细胞集落刺激因子组成。其中，所述L-谷氨酰胺在细胞临培养前加入；所述干细胞 因子、所述白细胞介素3、所述白细胞介素6、所述血小板生成素、所述促红细胞生成 素、所述粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子和所述粒细胞集落刺激因子均在细胞培养的过 程中加入。

上述无血清培养基中，所述培养基的pH为6.8-7.2。

上述无血清培养基中，

所述重组人胰岛素在所述无血清培养基中的浓度为5-30mg/L；

所述重组人转铁蛋白在所述无血清培养基中的浓度为20-80mg/L；

所述重组人血白蛋白在所述无血清培养基中的浓度为50-300mg/L

所述β-巯基乙醇在所述无血清培养基中的浓度为10-100mg/L；

所述乙醇胺在所述无血清培养基中的浓度为1-10mg/L；

所述胆固醇在所述无血清培养基中的浓度为1-10mg/L；

所述亚油酸在所述无血清培养基中的浓度为0.1-5mg/L；