[发明专利]基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法及培育基体

权利要求书

1.一种基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法，其特征是：其步骤是：a、无菌杂种胚的获得：把果树种子的种胚进行消毒处理得到无菌杂种胚样本；

b、试管植株的获得：在装有培养基质的试管内，把无菌杂种胚进行培养，获得胚萌发的植株得到试管植株；

c、试管外植株苗体的获得：当试管植株的胚根上已生长形成若干侧根并且大部分胚芽已生长形成10 cm以上的新梢；移栽到试管外育苗基质中，培育得到试管外植株，

其中：其步骤是：选取桃优系‘93’ב春雪’杂交种的成熟果实的胚为培育样本，

a、无菌杂种胚的获得：在超净台上用70%酒精擦洗果实表面，用灭菌刀切开果实取核，用灭菌锤子砸开核取出种胚，用无菌镊子剥去种皮，把去种皮的胚用浓度为100m/L-500mg/L的赤霉素即GA₃进行预处理得到无菌杂种胚样本；

b、试管植株的获得：去种皮胚经过100m/L-500mg/L的赤霉素预处理0.5-3小时后的无菌杂种胚样本接种在装有培养基质：MS + 1-5 mg/L GA₃ + 25-35 g/L蔗糖的试管内，在培养室进行培养，获得胚萌发的植株得到试管植株；

c、试管外植株苗体的获得：当试管植株在试管内培养4-6周时，胚已萌发生长成为绿苗体，绿苗体表现为：胚根上已生长形成若干侧根并且大部分胚芽已生长形成10 cm以上的新梢；

绿苗体进行试管外移栽，移栽前，先把瓶盖打开，在温度为20-25℃的散射阳光下练苗5-7天，用长镊子把苗从试管中取出，放入水盆中，洗掉根部残余培养基，移栽入装有试管外育苗基质的营养钵中，苗移栽入营养钵后，浇透水，用透明性好的塑料溥膜进行覆盖，对刚移栽的小苗进行保湿处理，以后每隔3-5天喷一次水，3-4周时，小苗长出新叶，此时可揭去塑料溥膜得到试管外植株，

试管内培养基质设置为包含有基本培养基、植物生长调节物质即赤霉素（GA₃）、碳源即蔗糖、抗氧化剂即半胱氨酸和抗坏血酸、无离子水、琼脂粉；

其中：基本培养基设置为 MS（Murashige and Skoog）培养基, MS 基本培养基组成为：

，

试管外育苗基质设置为包含有草炭、蛭石、珍珠岩，按照重量比例，草炭∶蛭石∶珍珠岩= 2∶0.8-1.1∶0.9-1.2。

2.根据权利要求1所述的基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法，其特征是：试管内培养基质在灭菌前调pH值到5.8，然后在121℃，1个大气压下高压灭菌20分钟。

3.根据权利要求1所述的基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法，其特征是：培养环境的培养温度设置为25 ± 2℃并且培养环境的光照周期设置为16小时/天。

4.根据权利要求1所述的基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法，其特征是：杂种果树品种设置为桃树或油桃。

5.根据权利要求1所述的基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法，其特征是：其步骤是：

a、无菌杂种胚的获得：取桃优系‘93’ב春雪’杂交种的成熟果实，剔除烂果，在超净台上用70%酒精擦洗果实表面，用灭菌刀切开果实取核，用灭菌锤子砸开核，取出种胚放在无菌培养皿内，用无菌镊子剥去种皮，把去种皮的胚用浓度为100m/L-500mg/L的赤霉素(GA₃)进行预处理0.5－3小时；

b、试管植株的获得：经过赤霉素预处理的胚接种到装有胚培养基：MS + 1-5 mg/L GA₃+ 30 g/L蔗糖的试管中，每管接种1个胚，接种后的试管放在培养室培养，培养室培养温度为25 ± 2℃，光照周期为16小时/天，光照强度为3000勒克斯；

c、试管外植株苗体的获得：胚培养4－6周时，胚根产生较多侧根，苗高也大都在10 cm以上，此时可以进行移栽，移栽前，先把瓶盖打开，放在温度为20-25℃的散射阳光下练苗5-7天，然后把苗移到温室，用长镊子把苗从瓶中取出，放入水盆中，洗掉根部残余培养基,移栽入装有育苗基质的营养钵中，育苗基质为草炭∶蛭石∶珍珠岩= 2∶0.8-1.1∶0.9-1.2，苗移栽入营养钵后，浇透水，用透明性好的塑料溥膜进行覆盖，目的是对刚移栽的小苗进行保湿，以后每隔3-5天喷一次水，3-4周时，小苗长出新叶，表明植株已经成活，此时可揭去塑料溥膜。

6.一种基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育基体，设置为包含有试管内培养基质和试管外育苗基质，试管内培养基质设置为包含有基本培养基、植物生长调节物质、 碳源、抗氧化剂、无离子水、琼脂粉；

其中：基本培养基设置为 MS（Murashige and Skoog）培养基, MS 基本培养基组成为：

无机成分 大量元素工作浓度（mg/L）NH₄NO₃1650KNO₃1900KH₂PO₄170MgSO₄·7H₂O370CaCl₂·2H₂O440无机成分 微量元素FeSO₄·7H₂O27.8EDTA37.3KI0.83H₃BO₃6.2MnSO₄·4H₂O22.3ZnSO₄·7H₂O8.6Na₂MoO₄·2H₂O0.25CuSO₄·5H₂O0.025CoCl₂·6H₂O0.025有机成分烟酸0.5VB10.5VB60.5甘氨酸2.0肌醇100琼脂粉6000

试管外育苗基质设置为包含有草炭、蛭石、珍珠岩，按照重量比例，草炭∶蛭石∶珍珠岩= 2∶0.8-1.1∶0.9-1.2，

植物生长调节物质设置为赤霉素（GA₃）， 碳源设置为蔗糖，抗氧化剂设置为半胱氨酸和抗坏血酸。