[发明专利]基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法及培育基体

说明书

一、技术领域

本发明涉及一种桃树杂种胚试管培育方法及培育基体，尤其是一种基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法及培育基体。

二、背景技术

植物的胚培养在克服远缘杂交种胚的早期败育、胚挽救、诱导体细胞胚的发生及砧木快繁等方面具有重要作用，特别是在核果类果树作物如桃、杏、樱桃等的早熟品种上，借助于胚培养技术，可成功实现幼胚即未成熟胚培养成苗，是实现核果类果树特早熟品种培育的基础，因此杂种桃胚试管培育方法及培育基体是一种重要的生物育种方法和育种基质，在现有的一种基于一次成苗的杂种果树胚试管培育方法及培育基体中，因为早熟果树品种的胚通常发育不全,采用常规播种不能出苗或萌芽率很低,而采用胚培养技术可以克服种胚不出苗的难题，但一些针对品质或抗性改良进行果树杂交育种的杂种，即使杂种胚已经发育成熟，常规播种也不能出苗或出苗率很低，这一问题严重阻碍了果树品种改良的育种进程。。

三、发明内容

本发明的客体是一种基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育方法，

本发明的客体是一种基于一次成苗的桃树杂种胚试管培育基体。

为了克服上述技术缺点，本发明的目的是提供一种基于一次成苗的杂种果树胚试管培育方法及培育基体，因此提高了杂交果树种子的发苗率。

为达到上述目的，本发明采取的技术方案是：一种基于一次成苗的杂种果树胚试管培育方法，其步骤是：a、无菌杂种胚的获得：把果树种子的种胚进行消毒处理得到无菌杂种胚样本；

b、试管植株的获得：在装有试管内培养基质的试管内，把无菌杂种胚进行培养，获得胚萌发的植株得到试管植株；

c、试管外植株苗体的获得：当试管植株的胚根上已生长形成若干侧根并且大部分胚芽已生长形成10 cm以上的新梢；移栽在试管外育苗基质中，培育得到试管外植株。

由于设计了对果树种子的种胚进行分步培育，在试管内培养基质中培育得到试管植株，在试管外育苗基质中培育得到室外正常生长的植株，不再直接种植果树种子，因此提高了杂交果树种子的发苗率。

本发明设计了，其步骤是：选取桃优系‘93’ב春雪’杂交种的成熟果实的胚为培育样本，

a、无菌杂种胚的获得：在超净台上用70%酒精擦洗果实表面，用灭菌刀切开果实取核，用灭菌锤子砸开核取出种胚，用无菌镊子剥去种皮，把去种皮的胚用浓度为100m/L-500mg/L的赤霉素即GA₃进行预处理得到无菌杂种胚样本；

b、试管植株的获得：去种皮胚经过100m/L-500mg/L的赤霉素预处理0.5-3小时后的无菌杂种胚样本接种在装有培养基质：MS + 1-5 mg/L GA₃ + 25-35 g/L蔗糖的试管内，在培养室进行培养，获得胚萌发的植株得到试管植株；

c、试管外植株苗体的获得：当试管植株在试管内培养4-6周时，胚已萌发生长成为绿苗体，绿苗体表现为：胚根上已生长形成若干侧根并且大部分胚芽已生长形成10 cm以上的新梢；

绿苗体进行试管外移栽，移栽前，先把瓶盖打开，在温度为20-25℃的散射阳光下练苗5-7天，用镊子把苗从瓶中取出，放入水盆中，洗掉根部残余培养基，移栽入装有试管外育苗基质的营养钵中，苗移栽入营养钵后，浇透水，用透明性好的塑料溥膜进行覆盖，对刚移栽的小苗进行保湿处理，以后每隔3-5天喷一次水，3-4周时，小苗长出新叶，此时可揭去塑料溥膜得到试管外植株。

本发明设计了，试管内培养基质设置为包含有基本培养基、植物生长调节物质即赤霉素（GA₃）、 碳源即蔗糖、抗氧化剂即半胱氨酸和抗坏血酸、无离子水、琼脂粉；

其中：基本培养基设置为 MS（Murashige and Skoog）培养基, MS 基本培养基组成为：