[发明专利]适合代谢组学水牛胚胎培养及检测胚胎发育潜能的方法

权利要求书

1.一种适合代谢组学的水牛胚胎培养方法，其特征在于：第一步，取未成熟的水牛卵母细胞，经体外成熟、体外受精后获得假定受精胚胎进行群体培养；第二步，待胚胎发育到囊胚阶段，进行单胚胎培养。

2.根据权利要求1所述的适合代谢组学的水牛胚胎培养方法，其特征在于按以下操作进行：取未成熟的水牛卵母细胞进行体外成熟，将体外成熟的卵子经体外受精后，把假定受精胚胎放到共培养液体系中，微滴群体培养；待胚胎发育到囊胚阶段，用捡卵针捡出囊胚，用PBS溶液洗涤1-2次，放入事先在培养箱中平衡2h以上的20μl盖油的SOF液培养，每个胚胎一滴，于培养箱中继续培养5-6h后，收集代谢液到200μl的EP管中-80℃冻存。

3.一种检测水牛胚胎发育潜能的方法，其特征在于按权利要求1所述培养方法进行培养，单胚胎培养后收集代谢液；通过LC/MS检测囊胚代谢液成分，通过PCA数据分析鉴定胚胎发育能力。

4.根据权利要求3所述的检测水牛胚胎发育潜能的方法，其特征在于所述代谢液按以下操作进行预处理：首先把样品从-80℃冰箱中，放入冰面上解冻，然后用超纯水预洗涤一次膜的Merck Millipore离心过滤管，4度12000g.min^-1离心15min。

5.根据权利要求4所述的检测水牛胚胎发育潜能的方法，其特征在于所述LC/MS检测条件及参数按以下设置：

选择前用乙晴冲洗柱子15min，用95％的0.1％甲酸水平衡柱子15min；

选择方法：液相，A相0.1％甲酸水，B相100％乙腈；其中，

0-2min 5％乙腈，

2-20min 5％乙腈-95％乙腈，

20min-23min 100％乙晴，

23min-23.1min 5％乙晴，

23.1min-25min 5％乙晴，

流速为0.30mL/min；进样量：2μL；

一级质谱参数：

二级质谱参数：

HEST SOURCE参数：