[发明专利]一种滁菊叶片离体高效再生的方法

权利要求书

1.一种滁菊叶片离体高效再生的方法，其特征在于：包括以下步骤：

1)取材：选取滁菊叶片作为外植体；

2)切片：将步骤1)中的滁菊叶片进行切片；

3)愈伤组织的诱导:将步骤2)中的切片接种于愈伤组织诱导培养基中进行愈伤组织的诱导培养；

4)愈伤组织的增殖：将步骤3)中诱导的切片愈伤组织接种于增殖培养基中进行愈伤组织的增殖；

5)愈伤组织的分化：将步骤4)中增殖后的愈伤组织切块并转接于分化培养基中进行愈伤组织的分化；

6)不定芽的增殖和伸长：将步骤5)中分化出不定芽的愈伤组织转接于不定芽增殖和伸长培养基中进行不定芽的增殖和伸长培养；

7)生根：待不定芽伸长至2～3cm,并伴有2～3个完全伸展的叶子时进行生根培养；

其中，所述步骤3)中愈伤组织诱导培养基包括MS+0.1～3.0mg/L TDZ+0.01～0.05mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8；

所述步骤4)中愈伤组织增殖培养基为MS+0.2～2.0mg/L TDZ+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8；

所述步骤5)中愈伤组织的分化培养基为MS+0.2～1.0mg/L TDZ+0.05～0.2mg/L 6-BA+0.1～1.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8；

所述步骤6)中不定芽增殖和伸长培养基为MS+0.5～2.0mg/L 6-BA+0.05～0.2mg/L TDZ+0.2～2.0mg/L NAA+30g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8；

所述步骤7)中的生根培养基为1/2MS+0.05～0.3mg/L IBA+0.05～0.5mg/L IAA+20g/L蔗糖+7.0g/L琼脂,pH＝5.8。

2.根据权利要求1所述的一种滁菊叶片离体高效再生的方法，其特征在于：所述步骤1)的滁菊叶片为田间滁菊优良株系当年生幼嫩枝条的叶片或离体再生所获得的滁菊无菌苗完全伸展的叶片。

3.根据权利要求2所述的一种滁菊叶片离体高效再生的方法，其特征在于：所述滁菊叶片离体高效再生的方法还包括表面消毒；表面消毒：将步骤1)中取材于田间的当年生幼嫩枝条的叶片经75％的无水乙醇擦拭一遍后，无菌工作台中用无菌水冲洗2～3遍；然后用75％的无水乙醇消毒10～25s后，用无菌水清洗2～3遍；然后用0.1％HgCl2溶液消毒1～3min,无菌水冲洗5～6遍。

4.根据权利要求1所述的一种滁菊叶片离体高效再生的方法，其特征在于：光照培养14～16d后，将步骤3)中诱导的叶片愈伤组织接种于增殖培养基中进行愈伤组织的增殖。

5.根据权利要求1所述的一种滁菊叶片离体高效再生的方法，其特征在于：光照培养10～14d后，将步骤4)中增殖后的愈伤组织切成(0.4～0.5)×(0.4～0.5)cm²大小的切块并转接于分化培养基中进行愈伤组织的分化。

6.根据权利要求1所述的一种滁菊叶片离体高效再生的方法，其特征在于：光照培养21～28d后，将步骤5)中分化出不定芽的愈伤组织转接于不定芽增殖和伸长培养基中进行不定芽的增殖和伸长培养。