[发明专利]一种检测猪巨细胞病毒胶体金试纸条

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种检测猪巨细胞病毒胶体金试纸条。

背景技术

猪巨细胞病毒(porcinecytomegalovirus，PCMV)属于疱疹病毒目，疱疹病毒科， β疱疹病毒亚科，巨细胞病毒属，可引起世界范围内的新生猪鼻炎，具体症状表现为 发育不良、鼻炎、肺炎、体重减少等症状，普遍发生致命疾病，如木乃伊胎、死产、 弱仔等。而当易感母猪或首次接触该病毒的怀孕母猪更容易产生木乃伊胎、死产、弱 仔。该病传播途径有水平传播、生殖传播和交配传播等多种途径。猪巨细胞病毒几乎 感染全世界猪群，但多为亚临床症状，治愈后终身传毒，传播可通过鼻、眼分泌物、 尿和娩出液体垂直传播和交配传播，死亡率达20～30％；环境差、温度波动大、连续 生产和不空舍消毒可发病，也与细菌等混合感染；随着异体器官移植进行有感染人的 威胁；可与细菌性疾病、猪蓝耳病毒、圆环病毒、伪狂犬等病毒混合感染，加重疫情。 虽世界范围内均有，但各地区的阳性率有一定差异，同时鉴于易对猪仔产生致命病害， 因次对猪巨细胞病毒的检测、预防与治疗至关重要。

PCMV基因组大小约为230～240kb，250个ORF，编码基因165个，编码二百多种 蛋白质。而糖蛋白有膜糖蛋白、gB、gH、gL、gM等多种糖蛋白，而gB蛋白是最丰富、 抗原性显著的病毒蛋白，也是目前研究最多的蛋白。

目前检测猪巨细胞病毒的方法主要是根据临床症状、血清学检验、荧光抗体检测、 PCR检测、ELISA以及检测巨细胞中形成鹰眼状包涵体等光镜方法。虽然当前检测方法 众多，但很不适合现场简单快速检测，需要大型仪器设备，费时费力。胶体金免疫层 析技术(Immunecolloidalgoldtechnique，GICT)是以胶体金作为示踪标志物应用 于抗原抗体的一种新型的免疫标记技术。胶体金是由氯金酸(HAuCl₄)在还原剂如白 磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下，聚合成为特定大小的金颗粒，并由于静电 作用成为一种稳定的胶体状态，称为胶体金。胶体金在弱碱环境下带负电荷，可与蛋 白质分子的正电荷基团形成牢固的结合，由于这种结合是静电结合，所以不影响蛋白 质的生物特性。胶体金除了与蛋白质结合以外，还可以与许多其它生物大分子结合， 如SPA、PHA、ConA等。根据胶体金的一些物理性状，如高电子密度、颗粒大小、形状 及颜色反应，加上结合物的免疫和生物学特性，具有成本低、范围广、稳定、简单快 速适合现场检测，因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学 等领域。

发明内容

本发明一个目的是提供一种检测猪巨细胞病毒抗体的胶体金试纸条。

本发明提供的胶体金试纸条，包括底板和放置在其上的样品垫、包被胶体金标记 IgG抗体金标垫、含有检测线T和质控线C的检测垫和吸水垫；

所述检测线T由抗原蛋白或抗原蛋白溶液形成；

上述抗原蛋白溶液溶剂为PB，PB配制：称量磷酸氢二钠5.37g，氯化钾0.2g，磷 酸二氢钾0.2g，加入超纯水至1000ml，混匀后备用。

所述抗原蛋白为如下a或b或c：

a)序列表中序列2所示的蛋白质；

b)在序列2所示的蛋白质的N端和/或C端连接标签得到的融合蛋白质；

c)将a)或b)所示的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/ 或添加且具有相同功能由序列2衍生的蛋白质。

上述的胶体金试纸条中，所述抗原蛋白溶液的浓度为6.1μg/mL。

上述的胶体金试纸条中，所述质控线C由IgG抗体的二抗或IgG抗体的二抗溶液 形成。

上述的胶体金试纸条中，所述IgG抗体为羊抗猪IgG抗体；

所述胶体金标记抗体为胶体金标记羊抗猪IgG抗体；

所述IgG抗体的二抗为兔抗羊IgG。

上述的胶体金试纸条中，所述胶体金标记羊抗猪IgG抗体为将胶体金溶液和山羊 抗猪IgG在反应体系中反应，得到胶体金标记羊抗猪IgG抗体溶液(溶剂为复溶液)；

所述胶体金溶液与所述山羊抗猪IgG的配比为406.12μg：1ml；

所述胶体金溶液中胶体金粒径为20nm。

所述反应体系的pH值为7.5-8.0。