[发明专利]采用UIO‑66‑NH2材料测定血清中唾液酸含量的方法

说明书

技术领域

本发明属于金属-有机框架复合材料应用技术领域，具体涉及一种采用UIO-66-NH₂材料测定血清中唾液酸含量的方法。

背景技术

金属-有机骨架材料(MOF)是金属离子与有机配体经配位键连接成的一类新型的纳米多孔材料。由于MOF材料具有八面体结构，其不仅具有孔隙率高、比表面积大、孔径可调、结构多样性等特点，而且在水中和有机溶液中表现出极大的热稳定性和化学稳定性，因而在诸多领域得到广泛应用，如气体吸附分离、催化作用、药物输送、生物成像等领域。然而， MOF材料在分析化学领域的应用远远落后于其他领域。

唾液酸是一种含有羧基的九碳糖，与生物体内很多生理功能相关。但是由于含有唾液酸样品的成分复杂，且唾液酸的测定也易受到其他成分的干扰，测定难度较大。因此，对样品进行前处理是准确分析样品中组分含量必不可少的步骤。分散固相萃取技术利用分散的吸附剂将样品溶液中被分析物吸附，分离样品的基体和杂质，然后用洗脱液解吸附或者加热解吸附，从而实现对目标物的分离和富集。目前一些商用吸附剂已用于唾液酸的吸附，但是其选择性、灵敏性较差，所得结果也相差较大。因此，开发一种高效灵敏的测定血清中唾液酸含量的方法刻不容缓。

目前，国内外还未发现采用UIO-66-NH₂材料测定血清中唾液酸含量方法的报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种高选择性、高灵敏性的采用UIO-66-NH₂材料测定血清中唾液酸含量的方法。

本发明所述的采用UIO-66-NH₂材料测定血清中唾液酸含量的方法，包括以下步骤：

(1)制备血清处理液：采用三氟乙酸将血清样品水解，除去蛋白质后离心得到血清处理液；

(2)分散固相萃取：将步骤(1)所得血清处理液与UIO-66-NH₂材料混合，经漩涡振荡萃取，血清处理液中的唾液酸被萃取到UIO-66-NH₂材料中，离心后得到含有唾液酸的 UIO-66-NH₂材料；

(3)超声洗脱：采用乙酸水溶液超声洗脱步骤(2)离心后得到的含有唾液酸的 UIO-66-NH₂材料，唾液酸从UIO-66-NH₂材料中完全洗脱得到洗脱液；

(4)衍生处理、色谱检测：将洗脱液通过荧光衍生试剂进行柱前衍生，最后进行高效液相色谱检测。

其中，

步骤(2)中UIO-66-NH₂材料的制备方法如下：

先将四氯化锆、2-氨基对苯二甲酸和水混合，加入N,N-二甲基甲酰胺后，搅拌至形成透明溶液，加热后在静止状态下进行结晶，结晶完毕后经冷却、过滤、洗涤、干燥、提取，得到UIO-66-NH₂材料粗品，再采用甲醇对粗品进行洗涤，最后烘干后密闭保存。

步骤(2)中，步骤(1)所得血清处理液与UIO-66-NH₂材料的体积质量比例是2:8～10，血清处理液以mL计，UIO-66-NH₂材料以mg计。

步骤(2)中涡旋振荡萃取时间5～7min，涡旋振荡萃取完毕后，离心10～20min得到含有唾液酸的UIO-66-NH₂材料。

步骤(3)中乙酸水溶液中乙酸的质量百分数为4～6％。

步骤(3)中乙酸水溶液与步骤(2)中UIO-66-NH₂材料的体积质量比例是0.2:8～10，乙酸水溶液以mL计，UIO-66-NH₂材料以mg计。

步骤(3)中洗脱时间为5～7min。

步骤(4)中荧光衍生试剂为2-[2-(7H-二苯并[a,g]咔唑-乙氧基)-乙基肼基甲酸酯 (DBCEEC)。

步骤(4)中柱前衍生步骤如下：向2mL安瓿瓶中依次加入200μL浓度为0.01mol/L的 2-[2-(7H-二苯并[a,g]咔唑-乙氧基)-乙基肼基甲酸酯乙腈溶液、45μL冰乙酸、200μL洗脱液，封口后在70℃下反应65min，取出冷却后，加入乙腈定容到1mL，再经0.22μm尼龙滤膜过滤。

衍生反应式如下：

本发明的有益效果如下：