[发明专利]一种PSMC2基因的实时荧光PCR检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种PSMC2基因的实时荧光PCR检测试剂盒。

背景技术

2005年美国卫生研究院、疾控中心等多家单位做了一个年度报告，“认为人类在抗癌大战中是失败”的，也就是说癌症死亡率没有降低，其列举出造成抗癌大战失败的几个因素是：(1)肿瘤细胞异质性；(2)肿瘤细胞耐药性；(3)抗癌药物设计思路不完善等。同时，该报告中亦提出应重新审视现有的诊治癌症的措施。本发明人在研究中发现，导致癌症死亡率不降的另二个重要原因是：(1)不能真正做到早期诊断；(2)转移的病理机制不清楚。所以检测肿瘤相关基因的表达量来辅助诊断各类癌症，有非常重要的临床价值。

26S蛋白酶体是存在于真核生物中的一种高度保守且依赖ATP的复合酶。Baumeister等研究表明26S蛋白酶体能够快速精确地降解目的蛋白，在几乎所有生命活动中都发挥重要作用，如细胞周期、细胞凋亡、DNA损伤修复、免疫应答、信号转导及细胞代谢等。

PSMC2(又称MSS1，Nbla10058，S7)基因,是一种ATP酶蛋白酶体，叫26S蛋白酶体亚基ATP酶2。该基因是编码ATP酶的亚基之一，是具有分子伴侣活性3A级ATP酶家族成员。这种亚单位已被证明会与一些基础转录因子发生相互作用，除了参与蛋白酶体功能，该亚基还可能参与转录的调节。研究表明，PSMC2基因通过免疫系统和G蛋白偶联受体信号通路等调节相关疾病，包括HIV-1等。

研究发现，可以通过检测PSMC2基因的表达量来诊断肺癌。免疫组化是检测组织样本中蛋白表达常用的方法，但大多数肿瘤患者是晚期，失去了手术机会，大块肿瘤组织难以获得。而实时荧光定量PCR技术以其特异性强，所需组织少(活检组织，脱落细胞等)，定量，敏感，方便等优点已得到全世界的公认，广泛用于肿瘤相关基因，病原体等诸多临床检测。用定量PCR法检测肿瘤相关基因，就能在基因水平上对肿瘤做更精确的早期诊断。而成熟标准的试剂盒是定量PCR成功检测的关键。目前荧光实时定量PCR所使用的荧光化学方法主要用染料法(SYBR Green Ⅰ染料)和探针法。其中SYBR Green Ⅰ是一种结合于小沟中的双链DNA结合染料，检测灵敏度很高，SYBR Green Ⅰ染料法不需要设计序列特异性探针，而且熔点曲线来分析产物的均一性，有助于更准确的分析和识别扩增产物和引物二聚体，是一种简便，性价比较高的实时监测方法；但是，由于SYBR Green Ⅰ与所有的双链DNA相结合，因此由引物二聚体，单链二级结构以及错误的扩增产物引起的假阳性会影响定量的精确性。

发明内容

针对现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供一种PSMC2基因的实时荧光PCR检测试剂盒及其制备和应用。

为了实现上述目的及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供一种PSMC2基因的实时荧光PCR检测试剂盒，所述试剂盒中包括PSMC2基因检测引物，所述PSMC2基因检测引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的反向引物。

优选地，所示试剂盒还包括GAPDH基因检测引物，所述GAPDH基因检测引物包括核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的正向引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的反向引物。

本发明的试剂盒采用实时荧光PCR检测技术进行PSMC2基因检测，根据扩增及检测情况可分析判断肺癌感染情况。因此，引物的设计是本发明试剂盒的关键。

基于本发明所述试剂盒是采用实时荧光PCR技术来进行检测的，所以试剂盒中还可以包括其他一些PCR所需要的常规试剂，如：SYBR premix ex Taq、无菌水(ddH₂O)、样品基因组DNA提取试剂、dNTPs、RT buffer、RNasin、M-MLV-RTase等常用PCR反应试剂中的一种或多种。由于此类PCR常用试剂均可经市场途径单独购得或者自行配置，因此具体需要将哪些试剂装配入试剂盒，可以根据客户实际需要配置，为方便起见，也可全部装配入试剂盒。

本发明的试剂盒，可以是含有独立包装的各组引物对，也可以是含有配置好的含有各组引物对的PCR检测混合液。