[发明专利]一种制备固定化芳香化酶的方法

权利要求书

1.一种制备固定化芳香化酶的方法，其特征在于包括如下步骤：

(a)球形介孔硅胶用10％盐酸活化即得固体介质A

(b)制备环氧基修饰的介孔硅胶为固体介质B

(c)芳香化酶用磷酸钾缓冲液稀释所得的溶液为液体介质C，其中酶浓度为10pmol/mL～40pmol/mL

(d)将固体介质B用磷酸钾缓冲液洗涤三次后，与液体介质C混合，低温下旋转震摇30min以上，离心除去上清液，沉淀经低温离心洗涤后分散保存于磷酸钾缓冲液即得固定化酶。

2.根据权利要求1所述的方法，芳香化酶来源于杆状病毒-昆虫细胞表达系统所表达纯化的人源芳香化酶。

3.根据权利要求1所述的方法，磷酸钾缓冲液的pH为6～8，离子强度为50mmol/L～200mmol/L。

4.根据权利要求1所述的方法，所述介孔硅胶为球形，其粒径为2～5μm，孔径为

5.根据权利要求1所述的方法制备所得的固定化芳香化酶在催化雄烯二酮中的应用。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征是，方法以雄烯二酮为底物，所用底物浓度为8.75μmol/L，NADPH终浓度为1mmol/L，5mg的固定化酶在恒温摇床中37℃反应20min，低温高速离心后，取上清液进行雌酮定量分析，沉淀经洗涤三次以上后保存于磷酸盐缓冲液中以备重复利用。