[发明专利]牛乳酪蛋白酶解CPPs的制作方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种牛乳酪蛋白酶解CPPs的制作方法。

背景技术

牛乳通常是指母牛正常分娩后分泌挤得的乳汁，因其营养齐全、蛋白质丰富而受到人们的青睐。然而牛乳蛋白理化特性又不同于人乳蛋白，服用后遇酸易凝固，不易被婴幼儿消化吸收。此外，部分牛乳蛋白会使人体产生过敏等不良后果。酪蛋白是牛乳中含量最高的蛋白质，约占牛乳中蛋白质含量的5/6，是一种大型、坚硬、致密、极困难消化分解的凝乳。人们一般通过将牛乳蛋白彻底酶解为多肽和氨基酸以解决这一问题。

酪蛋白磷酸肽(CPPs)是以酪蛋白为底物，经单酶或复合酶水解而制得的一种生物活性多肽，具有促进人体钙质和锌、铁等元素吸收的重要作用，具有“矿物质载体”的美誉。另外，CPPs可以针对人体免疫细胞（如淋巴细胞专一抗体、T细胞、B细胞等）完成激活、修复、再生、提升活性的全过程，激发自身免疫系统的主动性，从根本上恢复和加固自身免疫系统，其可用于各种营养、保健食品中。目前，CPPs已被公认为是极具开发价值的一类分子结构与生物功能间有明确对应关系的活性多肽物质。

发明内容

本发明的目的是提供一种牛乳酪蛋白酶解CPPs的制作方法，通过酶解牛乳酪蛋白得到纯度高的酪蛋白磷酸肽。

为了实现本发明的目的，采用如下技术方案：

一种牛乳酪蛋白酶解CPPs的制作方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）从牛乳中提取酪蛋白；

（2）配制酪蛋白溶液，用NaOH调节溶液PH值至8.6；

（3）配制胰蛋白酶溶液，使溶液PH值为8.6；

（4）将胰蛋白酶溶液加入到酪蛋白溶液中进行酶解反应，得到酪蛋白酶解液；

（5）取酪蛋白酶解液经中空纤维超滤膜分离出分子量为2000-4000的多肽溶液进行真空干燥，得到酪蛋白磷酸肽。

进一步地，所述步骤（1）采用新鲜牛乳与醋酸钠缓冲液在40-50℃下分别加热至相同温度后混匀，以2000r/min离心5-10min，静置后分离出一次沉淀；向所述一次沉淀中加入一定量95%的乙醇，以2000r/min离心5-10min后静置，分离出二次沉淀得到酪蛋白。

进一步地，所述新鲜牛乳与醋酸钠缓冲液各取5-10ml。

进一步地，所述乙醇为4-8ml。

进一步地，所述步骤（2）中的酪蛋白溶液的制作方法为：将酪蛋白溶解在0.05mol/L的三羟甲基氨基甲烷（Tris）缓冲液中。

进一步地，在所述酪蛋白溶液中加入少量的叠氮化钠。

进一步地，所述步骤（3）中的胰蛋白酶溶液的制作方法为：将胰蛋白酶溶解在0.05mol/LTris-HCl缓冲液（PH=8.6）中。

进一步地，所述步骤（4）中将一定量的胰蛋白酶溶液加入到酪蛋白溶液中，混合后置于37-40℃水浴中反应，待反应达到特定时间后，将反应液置于90-95℃水浴中加热10-15min，使酶解反应终止，反应液冷却至室温后，在10000r/min的条件下离心15-20min，取上清液酪蛋白酶解液。

具体实施方式

下面对本发明作进一步阐述：

一种牛乳酪蛋白酶解CPPs的制作方法，包括以下步骤：

（1）从牛乳中提取酪蛋白，由于蛋白质是羧基和氨基的两性电解质，在某一PH值溶液中，蛋白质分子所带的正电荷和负电荷相等，蛋白质以两性离子状态存在，这时溶液的PH值称为该蛋白质的等电点（PI）。在等电点时，蛋白质所带净电荷为零，溶解度最小，蛋白质沉淀析出，利用这个特点可以将蛋白质提取出来。如：

取新鲜牛乳和醋酸钠缓冲液各6ml，在45℃条件下分别加热，加热至相同温度时将其混匀，以2000r/min离心10min，静置后分离出一次沉淀；向一次沉淀中加入5ml95%的乙醇（由于粗提取的酪蛋白中还含有脂肪，因此用乙醇洗涤除去），以2000r/min离心10min后静置，分离出二次沉淀，即为酪蛋白。

（2）配制酪蛋白溶液，将酪蛋白溶解在0.05mol/L三羟甲基氨基甲烷（Tris）中，用NaOH调节溶液PH值至8.6，酪蛋白溶液的最终质量浓度为50mg/ml。为了防止酪蛋白变质，可在溶液中加入少量的叠氮化钠。

（3）配制胰蛋白酶溶液，将胰蛋白酶溶解在0.05mol/LTris-HCl（PH=8.6）中配成1mg/ml的胰蛋白酶溶液。