[发明专利]海洋芽孢杆菌N6-2及其产生的新型抗肿瘤活性蛋白

权利要求书

1.一种海洋芽孢杆菌N6-2，其特征在于该菌株能够产生具有抗肿瘤作用的活性 蛋白，该海洋芽孢杆菌N6-2于2014年11月23日保藏于中国武汉典型培养物 保藏中心，保藏号为CCTCCNO:M2014586。

2.根据权利要求1所述的一种海洋芽孢杆菌N6-2，其特征在于所述的海洋芽孢 杆菌N6-2菌株为革兰氏阴性菌，且具有芽孢，菌体形态呈现短杆棒状，多是有 两个菌体相连，单个菌体的大小为：宽：0.9-1.5μm，长：1-3.7μm。

3.根据权利要求1所述的一种海洋芽孢杆菌N6-2，其特征在于所述的海洋芽孢 杆菌N6-2的16SrDNA序列见序列表SEQ1。

4.权利要求1所述的海洋芽孢杆菌N6-2产生的活性蛋白，该活性蛋白的分子 量为24kDa，所述活性蛋白N端15个氨基酸序列为STGGSFYEPFNNYNT。

5.根据权利要求4所述活性蛋白的制备方法：将海洋芽孢杆菌N6-2菌株接种 于含有种子培养基的试管中，在16-37℃的摇床中100-300rpm，培养25-30h； 将上述培养后的菌株按3-7％(v/v)的接种量接种于盛有发酵培养基的摇瓶中， 16-37℃，100-300rpm，发酵培养48-90h；取菌株发酵液，离心，除掉发酵液中 的菌体和杂质，并调节其pH在6.5-7.5，即为粗制发酵样品；超滤法粗提活性物 质，获得10～30kDa组分，用硫酸铵沉淀法浓缩活性组分，浓缩的海洋芽孢杆 菌N6-2活性组分，过Q离子交换层析柱，将活性最好的穿透峰Q1脱盐后真空 冷冻干燥保存，将收集的穿透峰Q1，过CM离子交换柱，收集活性最好的穿透 峰C1，脱盐后真空冷冻干燥保存，即为海洋芽孢杆菌N6-2活性蛋白。

6.根据权利要求5所述活性蛋白的制备方法，其特征在于所述的种子培养基的 成分及终浓度：牛肉膏0.2-0.8％(质量体积比)，蛋白胨1-2％(质量体积比)， 氯化钠0.3-1％(质量体积比)，pH6.8-7.5。

7.根据权利要求5所述活性蛋白的制备方法，其特征在于所述的发酵培养基的 成分及终浓度：蔗糖0.5-1％(质量体积比)，牛肉膏0.2-0.8％(质量体积比)， 蛋白胨1-2％(质量体积比)，氯化钠0.3-1％(质量体积比)，矿物油0.5-1‰(v/v)， pH6.8-7.5。

8.一种权利要求4-7任何一项所述海洋芽孢杆菌N6-2活性蛋白在预防或治疗抗 人肝癌、人子宫颈癌、人胶质瘤、人胰腺癌和人肾透明细胞腺癌药物和/或保健 品中的应用。