[发明专利]一种鸡输卵管上皮细胞体外分离培养的方法

权利要求书

1.一种鸡输卵管上皮细胞体外分离培养的方法，包括以下步骤：

1)从产蛋鸡靠近卵泡的输卵管漏斗颈部无菌分离组织；

2)使用胰酶和EDTA联合消化所述分离得到的组织，得到鸡输卵管上皮细胞；

3)孵育所述鸡输卵管上皮细胞2h；

4)将所述步骤3)中孵育后的细胞进行细胞培养。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述的产蛋鸡为 25-28周龄的产蛋鸡。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述分离包括采集 组织，剪碎组织和清洗组织，所述的剪碎组织为将采集到的组织剪成边长小 于1mm的组织块。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的清洗组织使用的清洗 液包括磷酸盐缓冲溶液，所述清洗的次数为5～8次。

5.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲溶液含有 青霉素和链霉素双抗。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述胰酶的浓度为 0.2～0.3wt％，所述EDTA的浓度为0.01～0.03wt％。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤2)中所述消化的时间为 10～20min。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述孵育的温度为 37℃，所述孵育环境中CO₂的体积浓度为5％。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中所述的细胞培养的 装置为15～25％胎牛血清包被过的一次性T₂₅培养瓶。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤4)中所述的细胞培养 用的培养基包括以下组分：含有体积分数为4～6％的胎牛血清DMEM/F12， 15～25g/L表皮生长因子，80～120mg/L肝素钠，2～3mg/L胰岛素，180～220 mmol/L谷氨酰胺，180～220μg/mL青霉素，180～220μg/mL链霉素。