[发明专利]一种生态修复用保定苜蓿的组织培养方法

权利要求书

1.一种生态修复用保定苜蓿的组织培养方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)外植体的选择：选择发芽4～6天的苜蓿幼苗的子叶作为外植体；

2)愈伤组织的诱导：将所述外植体接种到愈伤诱导培养基中，培养至形成愈伤组织；

所述愈伤诱导培养基为添加了3mg/L 2,4-D、0.2mg/L 6-BA、25～35g/L蔗糖和2～6g/L植物凝胶的MS培养基；

3)愈伤组织的分化：

将所述愈伤组织接种到前期分化培养基中，至出现体胚；再将所述体胚接种到后期分化培养基中，至分化出芽；

所述前期分化培养基为添加了0.4mg/L 6-BA、25～35g/L蔗糖和2～6g/L植物凝胶的MS培养基；

所述后期分化培养基为添加了14～16g/L蔗糖和2～6g/L植物凝胶的1/2MS培养基；

4)生根培养：将所述芽接种到生根培养基中进行生根培养，得苜蓿幼苗；

生根培养基为添加了1.0mg/L NAA、10～20g/L蔗糖和5～9g/L琼脂的1/2MS培养基；

所述愈伤诱导培养基、前期分化培养基、后期分化培养基和生根培养基的pH均为5.8。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤的组织诱导过程中的培养条件为温度24～26℃，光照30～50μE/m²/s，16h光照培养，8h黑暗培养。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤组织的分化过程中的培养条件为温度24～26℃，光照40～50μE/m²/s，光照周期为16h光照培养，8h黑暗培养。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述生根培养的过程中的培养条件为温度24～26℃，光照40～50μE/m²/s，16h光照培养，8h黑暗培养。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述愈伤的诱导过程中，每2周继代一次。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在后期分化培养过程中，至所述芽生长至8～10cm再接入生根培养基。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)外植体的选择：选择发芽5天的苜蓿幼苗的子叶作为外植体；

2)愈伤组织的诱导：将所述外植体接种到愈伤诱导培养基中，培养至形成愈伤组织；

所述愈伤诱导培养基为添加了3mg/L 2,4-D、0.2mg/L 6-BA、30g/L蔗糖和4g/L植物凝胶的MS培养基；

3)愈伤组织的分化：

将所述愈伤组织接种到前期分化培养基中，至出现体胚；再将所述体胚接种到后期分化培养基中，至分化出芽；

所述前期分化培养基为添加了0.4mg/L 6-BA、30g/L蔗糖和4g/L植物凝胶的MS培养基；

所述后期分化培养基为添加了15g/L蔗糖和4g/L植物凝胶的1/2MS培养基；

4)生根培养：将所述芽接种到生根培养基中进行生根培养，得苜蓿幼苗；

生根培养基为添加了1.0mg/L NAA、15g/L蔗糖和7g/L琼脂的1/2MS培养基；

所述愈伤诱导培养基、前期分化培养基、后期分化培养基和生根培养基的pH均为5.8。