[发明专利]一种生态修复用保定苜蓿的组织培养方法

说明书

技术领域

本发明属于植物组织培养领域，具体涉及一种生态修复用保定苜蓿(Medicago sativa L.cv.Baoding)的组织培养的方法。

背景技术

紫花苜蓿是一种重要的牧草，由于其具有营养价值高、产量高、能产生许多优良植物蛋白等优点，深受牛羊的喜爱，被誉为“牧草之王”。在美国，紫花苜蓿已经成为了第四大种植作物，是主要的畜牧饲料来源。保定苜蓿是紫花苜蓿中一个重要的品种，在国内，常被作为一个优选种植品种。

目前关于保定苜蓿的离体组织培养尚未见报道，研究主要集中紫花苜蓿其他品种，在其他品种的研究已经有用胚轴，叶片，子叶等外植体来诱导愈伤，利用离体组织来诱导愈伤进而使植株再生是一种普遍方法，但也存在愈伤生长慢，芽分化率低，不同外植体的再生率因品种差异而不同，不同的品种的组培特性也不一样，例如危晓薇等(危晓薇蔡丽娟李仁敬，紫花苜蓿组织培养及其再生植株，新疆农业科学，1991,10(3):73-74)利用新疆和田大叶紫花苜蓿无菌子叶和下胚轴为外植体进行离体培养，以SH为基本培养基分别添加0.5mg-3mg/LNAA和0.1mg/LKT的植物生长调节剂，外植体愈伤的诱导和芽的分化都使用这种培养基。研究结果发现，子叶的愈伤诱导率为52.3％，分化率为25％；下胚轴愈伤诱导率为100％，分化率为25.9％。

此外，徐博等(徐博，任伟，王英哲等，紫花苜蓿子叶的高频离体再生体系的建立与优化，湖北农业科学，2015,20(10)：5160-5161)以东北地区不同的紫花苜蓿(公农1号、公农2号、公农5号、龙牧801和龙牧803)的子叶为外植体进行离体培养，并进行培养基配方优化，研究发现MS+2mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT为愈伤最佳诱导培养基，UM+1.2mg/L KT为最佳分化培养基，不同基因型的愈伤诱导率存在显著差异，其中公农5号表现最佳。

此外，侯永霞等(侯永霞，王俊杰等，野生黄花苜蓿组织培养及再生体系研究，草地学报，2012,3(5)：523-528)以呼伦贝尔草原野生黄花苜蓿无菌苗的子叶和下胚轴为外植体进行离体培养，研究发现，MS+1.5mg/L 2,4-D+0.4mg/L 6-BA+30g/L蔗糖+7g/L琼脂为愈伤诱导培养基，子叶和下胚轴愈伤诱导率均可达到100％；MS+0.5mg/L KT+0.5mg/L NAA+20g/L蔗糖+7g/L琼脂为胚性愈伤形成培养基，胚性愈伤形成率为81.5％；MS+0.25mg/L KT+0.05mg/L NAA+20g/L蔗糖+7g/L琼脂为分化培养基，芽的分化率为36.5％；

此外，王庆东等(王庆东，刘青青等，紫花苜蓿NFF2高效组织培养再生体系的建立,郑州牧业工程高等专科学校学报，2013,4(11)：23-25)以NFF2无菌苗叶柄为外植体进行离体培养，研究发现，以SH+1.0mg/L 2,4-D+0.2mg/L为愈伤诱导培养基，愈伤诱导率为91％；以MSO为基础培养基，添加一定的浓度的KT，结果发现MSO培养基为最佳的分化培养基，分化率为77％。

此外，耿小丽等(耿小丽，魏臻武等，苜蓿花药培养及倍性鉴定，草原与草坪，2008,5(5)：1-5)以紫花苜蓿品种阿尔岗金与Salado杂交的F1代的花药为外植进行离体培养，研究发现，NB+0.5mg/L2,4-D+0.3mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA+3.0mg/L KT为最佳愈伤诱导培养基，愈伤诱导率为45.8％；MS+0.2mg/L NAA+3.0mg/L 6-BA为最佳的分化培养基，芽的分化率为62％。

此外，王新等(王新，贾永锋，紫花苜蓿对土壤重金属富集及污染修复的潜力，土壤通报，2009,4(8)：933-935)开展了在重金属复合污染条件下苜蓿田间小区试验研究，分析了重金属复合污染对紫花苜蓿生长的影响及植株体中重金属吸收特征及紫花苜蓿对重金属污染土壤修复的能力，结果发现，当土壤重金属浓度含量低剂量时，紫花苜蓿的生长不受重金属的胁迫影响，反而苜蓿的湿重比对照增加了14.18％，株高增加了6.25％，高剂量处理时，苜蓿湿重比对照减少5.97％，株高降低了8.75％，苜蓿对重金属吸收系数大小依次为Cd>Zn>Cu>Pb。

综上所述，在紫花苜蓿其他品种离体组织培养研究已经比较成熟，但存在技术难题：