[发明专利]一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法

权利要求书

1.一种同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，采用高效液相色谱串联质谱技术检测经预处理的校正标样和经预处理的血浆样品，利用内标法定量，以福沙匹坦和阿瑞匹坦校正标样的浓度为X轴，福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标的峰面积比值为Y轴，建立标准曲线方程，将血浆样品中福沙匹坦和阿瑞匹坦与内标峰面积的比值代入标准曲线方程中，计算福沙匹坦和阿瑞匹坦的浓度，具体色谱条件为：

(1)高效液相色谱条件：

流动相A：10mM乙酸铵和0.02g/100mL EDTA水溶液；

流动相B：乙腈；

色谱柱：Waters XTerra MS C18，2.1×50mm，3.5μm；

采用梯度洗脱方式，见表1；

柱温：30℃；

进样量5μL；

表1 流动相梯度洗脱参数

表2 福沙匹坦、阿瑞匹坦和内标的质谱参数

(2)质谱条件：采用ESI离子源、正离子MRM模式检测，离子源参数如下：CAD：4；CUR：10；GS1：60；GS2：50；IS：5000；TEM：600；主要化合物其他相关参数见表2。

2.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，所述的血浆为人或动物的血浆。

3.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，所述的经预处理的血浆样品按照如下方法制备得到：取血浆样品10OμL，加入甲醇和稀释液各10μL，加入内标0.999μg·mL^-1格列苯脲30μL，加入乙腈300μL，涡旋1min混匀，12000rmp 10min，4℃离心，吸取上清液，即得。

4.根据权利要求1所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，校正标样按如下方法制备得到：

精密称取10.89mg福沙匹坦双葡甲胺对照品至10mL容量瓶中，加入稀释液定容至刻度，混匀得到0.666mg·mL^-1福沙匹坦标准曲线储备液；精密量取适量储备液以稀释液稀释至浓度为100μg·mL^-1福沙匹坦溶液；再以稀释液依次稀释，配成浓度分别为0.200μg·mL^-1、0.400μg·mL^-1、1.00μg·mL^-1、2.50μg·mL^-1、5.00μg·mL^-1、20.0μg·mL^-1和50.0μg·mL^-1的福沙匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用；

精密称取12.16mg阿瑞匹坦对照品至10mL容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀得到1.216mg·mL^-1阿瑞匹坦标准曲线储备液，于-20℃冰箱中保存备用；精密量取适量储备液以甲醇稀释至浓度为50.0μg·mL^-1阿瑞匹坦溶液；再以甲醇液依次稀释，配成浓度分别为0.100μg·mL^-1、0.200μg·mL^-1、0.400μg·mL^-1、1.00μg·mL^-1、2.50μg·mL^-1、10.0μg·mL^-1和20.0μg·mL^-1的阿瑞匹坦标准曲线工作液，于-20℃冰箱中保存备用；

分别精密吸取10μL各浓度的福沙匹坦和阿瑞匹坦标准曲线工作液置于1.5mL EP管中，向其中分别加入100μL空白血浆，涡旋混匀，即得含福沙匹坦和阿瑞匹坦浓度分别为0.0200μg·mL^-1和0.0100μg·mL^-1、0.0400μg·mL^-1和0.0200μg·mL^-1、0.100μg·mL^-1和0.0400μg·mL^-1、0.250μg·mL^-1和0.100μg·mL^-1、0.500μg·mL^-1和0.250μg·mL^-1、2.00μg·mL^-1和1.00μg·mL^-1、5.00μg·mL^-1和2.00μg·mL^-1、10.0μg·mL^-1和5.00μg·mL^-1的校正标样。

5.根据权利要求4所述的同时检测血浆中福沙匹坦和阿瑞匹坦的方法，其特征在于，所述的稀释液按如下方法制备得到：取磷酸二氢铵5.76g，加1000mL水使溶解，用氨水调节pH值至9.0得磷酸盐缓冲液，再按照8∶2的体积比将磷酸盐缓冲液与乙腈混合，即得稀释液。