[发明专利]基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法

权利要求书

1.一种基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)将两组不同生理或病理条件的整体蛋白分别作为控制组与疾病组，分别进行赖氨酸ε-氨基及N端氨基全部同重标记，分别标记为-N(C₁₁¹³CH₁₁N⁺OCH₂)₂和-N(C₁₂H₁₁¹⁵N⁺OCH₂)₂，其单个标记后氨基的质量差异为12.6mDa；

(2)同重标记后两组蛋白按等比例混合进行高分辨质谱和串级质谱分析得到一个数据组；

(3)对数据组进行定性、定量数据库搜索，得到蛋白质的ID及疾病组每一个蛋白质相对于控制组的相对比例，即疾病条件下所有蛋白的上调或下调情况，上调或下调倍数最大的蛋白即为与该疾病发生、发展相关的蛋白；

步骤(1)中，控制组蛋白或疾病组蛋白，一组蛋白质用氰基硼氢化钠和含¹³C的N(3-醛基-4-羟基苄基)氯化吡啶鎓盐标记，另一组蛋白质用氰基硼氢化钠和含¹⁵N的N(3-醛基-4-羟基苄基)氯化吡啶鎓盐标记；

含¹³C的N(3-醛基-4-羟基苄基)氯化吡啶鎓盐的合成采用¹³C标记多聚甲醛，含¹⁵N的N(3-醛基-4-羟基苄基)氯化吡啶鎓盐的合成采用¹⁵N标记的吡啶。

2.根据权利要求1所述的一种基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法，其特征在于，步骤(1)中进行同重标记的反应过程和条件如下：蛋白溶解在乙酸钠缓冲溶液后，加入含¹³C的N(3-醛基-4-羟基苄基)氯化吡啶鎓盐或含¹⁵N的N(3-醛基-4-羟基苄基)氯化吡啶鎓盐，在搅拌条件下加入氰基硼氢化钠溶液，室温反应1小时后，用氨水淬灭。

3.根据权利要求2所述的一种基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法，其特征在于，所述的乙酸钠缓冲溶液为100mmol/L，pH为5-6。

4.根据权利要求2所述的一种基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法，其特征在于，所述的含¹³C的N(3-醛基-4-羟基苄基)氯化吡啶鎓盐或含¹⁵N的N(3-醛基-4-羟基苄基)氯化吡啶鎓盐溶液质量分数为4％(w/w)。

5.根据权利要求2所述的一种基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法，其特征在于，所述的氨水溶液体积分数为4％(v/v)。

6.根据权利要求1所述的一种基于自带电荷同位素试剂的生物分子标记和定量分析方法，其特征在于，步骤(2)所述的等比例混合指：按照控制组与疾病组的重量、体积或摩尔量以1:1比例进行混合。