[发明专利]利用线粒体分子标记鉴定浙江浆蜂的方法有效
| 申请号： | 201610296879.8 | 申请日： | 2016-05-06 |
| 公开（公告）号： | CN105779627B | 公开（公告）日： | 2019-03-08 |
| 发明（设计）人： | 曹联飞 | 申请（专利权）人： | 浙江省农业科学院 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888 |
| 代理公司： | 杭州九洲专利事务所有限公司 33101 | 代理人： | 陈继亮 |
| 地址： | 310021 *** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 利用 线粒体 分子 标记 鉴定 浙江 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种利用线粒体分子标记鉴定浙江浆蜂的方法，其特征在于：包括下述步骤：
(1)蜜蜂取样：从考察的纯种西方蜜蜂蜂群中，随机取封盖期蜜蜂工蜂个体1只，放于冰箱-20℃保存备用；
(2)蜜蜂基因组DNA提取：剪取步骤(1)中保存的蜜蜂样本的头部和胸部，使用酚仿抽提法提取DNA；
(3)PCR扩增和测序：以步骤(2)中获得的基因组DNA为模板进行PCR反应，引物为：F：5’-TGATAAAAGAAATATTTTGA-3’，R：5’-GAATCTAATTAATAAAAAA-3’；PCR反应体系为：总体积20μL，含Mg2+的10×PCR Buffer 2μL，2.5mM dNTPs 2μL，10μM引物F和R各0.8μL，DNA模板2μL，5U/μLTaq酶0.2μL，灭菌双蒸水补足体积；PCR反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性1min，42℃退火2min，72℃延伸2min，共30个循环，72℃后延伸10min；将获得的PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，确认扩增成功后进行测序；
(4)鉴定浙江浆蜂蜂群：将步骤(3)的测序结果使用DNAStar软件进行序列查看和校正，根据等位基因鉴定浙江浆蜂蜂群，当SEQ ID NO.1中第184个碱基等位基因为A时，此蜂群为浙江浆蜂。
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