[发明专利]免疫比浊法检测类风湿因子的检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明属于疾病的生物检测、诊断技术领域，涉及一种用于类风湿因子的胶乳增强免疫比浊试剂盒及其检测方法，具体涉及一种基于免疫比浊法的定量检测类风湿因子的检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

类风湿因子(rheumatoid factor,RF)是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。RF最初由Rose等(1984年)在类风湿性关节炎(RA)患者血清中发现。RA患者体内有产生RF的B细胞克隆，在变性IgG或EB病毒的直接作用下可大量合成RF，RF主要为19S的IgM，也有7S的IgG和IgA，它与天然IgG结合的能力较差，最易与人和动物的变性IgG或免疫复合物中的IgG结合。RF与体内变性的IgG结合形成免疫复合物后可活化补体，或被吞噬细胞吞噬。由吞噬细胞释放的溶酶体酶、活化肽、胶原酶、前列腺素E2等物质，在细胞因子和炎性粘附分子的参与下，致组织炎性损伤，可使患者发生骨关节炎及血管炎。常见的RF有IgM型、IgG型、IgA型和IgE型(注：在临床内科学中描述为四型，没有IgD型；但在实验室诊断学中描述为5型)，是类风湿关节炎血清中针对IgG FC片段上抗原表位的一类自身抗体，类风湿因子阳性患者较多伴有关节外表现，如皮下结节及血管炎等，IgM型RF阳性率为60％～78％。

RF的常规检测方法有胶乳凝集试验、双抗原夹心ELISA法、速率散射比浊法等，但以上方法均存在一定的弊端，如胶乳凝集试验检测灵敏度低，双抗原夹心ELISA法检测速度慢，检测过程繁琐对操作人员的要求较高，速率散射比浊法检测的线性范围窄、重复性差等。

发明内容

发明目的：本发明的第一个目的是提供一种灵敏度高、操作简便、重复性好的基于免疫比浊法的定量检测类风湿因子的检测试剂盒；本发明所建立的用于测定类风湿因子的试剂盒采用胶乳增强免疫比浊法，可实现对类风湿因子快速且准确的检测。

本发明的第二个目的是提供测定类风湿因子的胶乳增强免疫比浊试剂盒的制备方 法；

本发明目的在于针对现有技术的不足，提供一种灵敏度高、操作简便、重复性好的免疫比浊法检测类风湿因子的检测试剂盒及其制备、使用方法。

技术方案：本发明所述的免疫比浊法检测类风湿因子的检测试剂盒，包括检测比色杯、检测比色杯盖、空白液、校准品和质控品，所述检测比色杯内预分装有检测试剂R1，所述检测比色杯盖内预分装有检测试剂R2，所述检测试剂R1为稀释液，检测试剂R2为偶联了类风湿因子单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳和偶联了类风湿因子多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的混合物，两者的混合比例为3:2～5。

进一步地，所述稀释液为含有0.9wt％NaCl、3wt％PEG6000、0.75wt％BSA以及0.1wt％叠氮钠的6wt％PBS磷酸缓冲液。

进一步地，所述偶联了类风湿因子单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的粒径为50～80nm，偶联了类风湿因子多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳的粒径为150～200nm。

进一步地，所述空白液为6wt％PBS磷酸缓冲液。

进一步地，所述校准品为包括类风湿因子的浓度分别为0、15、30、60、120IU/ml的校准品。

进一步地，所述的质控品中类风湿因子的浓度为10～50IU/ml。

上述免疫比浊法检测类风湿因子的检测试剂盒的制备方法，包括如下步骤：

(1)配制R1稀释液；

(2)配制羧基化的胶乳制剂R2；

(3)配制标准品稀释液；

(4)配制标准品；

(5)配制校准品及质控品；

(6)稀释胶乳颗粒，并检测筛选出合格品；

(7)将检测合格的胶乳微粒稀释液进行分装组装成试剂盒。

进一步地，步骤(2)中所述羧基化的胶乳制剂R2的配制过程具体如下：①聚苯乙烯胶乳的活化；②制备偶联类风湿因子单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳；③制备偶联类风湿因子多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳；④将偶联类风湿因子单克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳和偶联类风湿因子多克隆抗体的羧基化的聚苯乙烯胶乳按比例混合。

进一步地，所述活化羧基化的聚苯乙烯胶乳过程中使用的活化剂为含有质量比例为1～3：10的N,N'-二异丙基碳二亚胺和N-羟基苯并三氮唑混合物的2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液。