[发明专利]一种用于检测人源性HSP70-1基因表达水平的引物组合物及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测人源性HSP70‑1基因表达水平的引物组合物及其应用，引物组合物由引物组1和引物组2组成，引物组1用于HSP70‑1基因检测，引物组2用于RPL19内参基因检测。本发明还涉及所述引物组合物在制备用于检测人源性HSP70‑1基因表达水平的试剂中的应用。本发明采用的技术方案，与现有技术相比，能够特异性的检测HSP70‑1基因的表达水平，避免了同源性基因的干扰；检测的灵敏度非常高；无需使用荧光探针，设计简单；检测过程准确高效，并且检测时间短，应用前景广阔。

技术领域

本发明属基因技术领域，具体涉及一种用于检测人源性HSP70-1基因表达水平的引物组合物及其应用。

背景技术

热休克蛋白是一组在生物进化过程中高度保守的蛋白质分子家族。该家族成员根据分子量大小可分为HSP100、HSP90、HSP70、HSP60、HSP28等几大类。HSP70是分子量在70KD左右的热休克蛋白,是热休克蛋白家族中最保守、最重要的一员,被称为主要热休克蛋白,它们由HSP70基因家族编码，是一种非特异性细胞保护蛋白。HSP70可分为结构型HSP70和诱导型HSP70，结构型HSP70为细胞在正常状态下即可产生的，诱导型HSP70为细胞在受到一些刺激时产生，正常细胞中仅少量表达或不表达。HSP70-1为典型的诱导型HSP70，研究表明除了因热休克刺激而产生以外，还有很多因素(如缺血、缺氧金属、病毒感染、组织损伤等)都可以诱导其产生，因此热休克蛋白又称为应激蛋白(stress protein)。

HSP70是生物体内含量最多的分子伴侣，参与细胞周期调节、DNA损伤修复及细胞凋亡，可维持细胞蛋白稳定，提高细胞对应激源的耐受性，使细胞维持正常的生理功能。通常环境中不利因素的作用会诱导机体产生应激反应和HSP70表达，因此可将HSP70的表达作为一个潜在性的环境应激和毒性的量化指标。研究表明HSP70在神经退行性疾病中也起重要作用，例如帕金森病(Parkinson Disease,PD)是一种椎体外系进行性神经退化性疾病，病理学主要表现为黑质多巴胺能神经元和纹状体多巴胺能神经纤维的数量显著下降。研究表明氧化应激损伤和α-突触核蛋白神经免疫反应是导致帕金森病的主要原因，都能产生应激反应。HSP70作为分子伴侣家族中的一员,是一种重要的应激蛋白,能与错误折叠的蛋白相互作用，阻止聚集物的形成，并且还有助于错误折叠蛋白的降解，HSP70能减轻帕金森病细胞模型中α-突触核蛋白毒性的作用因此将其用于PD的发病机制与疾病治疗方面的研究。

作为热休克蛋白家族中的重要成员，HSP70能促进肿瘤细胞的生长。HSP70在多种肿瘤组织中表达异常，与肿瘤的发生、发展、肿瘤免疫、肿瘤治疗中耐药性和肿瘤的预后等都有密切关系。正常细胞仅表达少量HSP70，HSP70参与细胞的生长代谢，并受细胞周期的严格调控；而肿瘤细胞即使在无应激条件下，也能持续表达高水平HSP70，并出现异常分布和定位，例如卵巢癌细胞中HSP70的表达较正常卵巢细胞高几倍,口腔鳞癌中表达更高。Beer等的研究提示HSP70在早期肺腺癌中过表达是1个不良预后的分子标志物，因此可通过测定HSP70的表达水平研究其与疾病的发生发展的相关性，为肿瘤的诊治提供更充分的理论依据。