[发明专利]一种抗氧化肽混合物及其制备方法

权利要求书

1.一种抗氧化肽混合物的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括以下步骤：

步骤1、将虾剥除虾仁后剩余的虾头与虾壳洗净、烘干、粉碎，过筛，得到虾副产物粉；

步骤2、向磷酸盐缓冲液中加入所述虾副产物粉，溶解得到虾副产物总蛋白提取液；

步骤3、向60mL所述虾副产物总蛋白提取液中加入24mg 10000U/mgα-胰凝乳蛋白酶，漩涡混匀，在37℃下水解反应4h，90℃下终止水解反应，离心，取上清，得到所述α-胰凝乳蛋白酶酶解液；

步骤4、向所述α-胰凝乳蛋白酶酶解液中加入嗜热菌蛋白酶，混匀，进行水解反应；高温终止水解反应，得到嗜热菌蛋白酶酶解液；

步骤5、透析所述嗜热菌蛋白酶酶解液，取透析液中500-1000Da的组分；透析的具体步骤为；将所述嗜热菌蛋白酶酶解液放入1000Da纤维素酯膜透析袋，浸没于去离子水中透析，小于1000Da的组分扩散至去离子水中，将含有小于1000Da的组分的去离子水旋转蒸发浓缩后装入500Da纤维素酯膜透析袋内，浸没于去离子水中透析，得到袋内的500-1000Da的组分和袋外的小于500Da的组分，取所述500-1000Da的组分；

步骤6、将所述500-1000Da的组分经凝胶层析分离，取凝胶层析分离产物中抗氧化活性最高的组分G₁；

步骤7、将所述组分G₁经离子交换色谱分离，取抗氧化活性最高的组分H₂。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤2具体为：称取0.4g虾副产物粉，加入到6mL磷酸盐缓冲液中，37℃摇床孵育2h，得到所述虾副产物总蛋白提取液。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤4具体为：取所述α-胰凝乳蛋白酶酶解液9.8mL，添加12mg 175U/mL嗜热菌蛋白酶，漩涡混匀，于70℃下水解反应6h，90℃下终止水解反应，得到所述嗜热菌蛋白酶酶解液。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，两次透析的时间均为12h。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤6具体为：将所述500-1000Da的组分经过旋转蒸发浓缩后，用Sephadex G-15凝胶柱层析分离，得到三个组分G₁-G₃，取活性最高的第一个组分G₁。

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述虾为南美白对虾。

7.根据权利要求1-6中任一项所述的制备方法得到的抗氧化肽混合物。

8.根据权利要求7所述的抗氧化肽混合物，其特征在于，所述抗氧化肽混合物的DPPH自由基清除能力为10.54±0.03μmol AAE/g pro，铁离子还原能力为89.29±0.01μmol AAE/gpro，所述抗氧化肽混合物中分子的大小为500-1000Da。