[发明专利]一种抗氧化肽混合物及其制备方法

说明书

本发明公开了一种抗氧化肽混合物的制备方法，利用虾副产物，通过α‑胰凝乳蛋白酶和嗜热菌蛋白酶两步酶解，经Sephadex G‑15凝胶层析和DEAE Sephacel离子交换色谱分离得到1,1‑二苯基‑2‑苦基肼(DPPH)自由基清除能力为10.54±0.03μmol AAE/g pro，铁离子还原能力(FRAP法)为89.29±0.01μmol AAE/g pro的抗氧化肽混合物。本发明还公开了由上述方法得到的抗氧化肽混合物，分子的大小为500‑1000Da。本发明为虾副产物提供了一种新的利用途径，降低了资源浪费和污染，提升了虾副产物的商业价值和利用率。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种源自虾副产物的抗氧化肽混合物及其制备方法。

背景技术

氧化反应会对食品和生物系统产生很多不利的影响，是引起食品腐败、营养品质和安全性下降的重要原因。近些年，抗氧化剂的用途越来越广泛，不仅用于含脂肪食品的氧化预防，而且作为功能因子用于保健食品及化妆品等的开发。人工合成的抗氧化剂因具有潜在的副作用而受到限制，因此天然、无毒副作用的食源性抗氧化产品更有吸引力。天然抗氧化肽是以食物蛋白为原料，通过提取、酶解或发酵，然后通过分离纯化制备的一类具有抗氧化效果的肽。

虾副产物中蛋白质含量约占干重的50-60％，且氨基酸种类齐全，具有很高的营养价值，但目前利用率很低。如果能选用合适的酶对其进行酶解制备抗氧化肽，将会提高虾副产物的利用价值。

因此，本领域的技术人员致力于通过酶解和纯化的方式，利用虾副产物等利用率低、商业价值小的蛋白质来源，制备抗氧化肽。

发明内容

本发明提供了一种源自虾副产物的抗氧化肽混合物及其制备方法。具体通过以下技术方案实现：

本发明一方面提供了一种抗氧化肽混合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、将虾剥除虾仁后剩余的虾头与虾壳洗净、烘干、粉碎，过筛，得到虾副产物粉；

步骤2、向磷酸盐缓冲液中加入上述虾副产物粉，溶解得到虾副产物总蛋白提取液；

步骤3、向上述虾副产物总蛋白提取液中加入α-胰凝乳蛋白酶，混匀，进行水解反应；高温终止水解反应，离心取上清液，得到α-胰凝乳蛋白酶酶解液；

步骤4、向上述α-胰凝乳蛋白酶酶解液中加入嗜热菌蛋白酶，混匀，进行水解反应；高温终止水解反应，得到嗜热菌蛋白酶酶解液；

步骤5、透析上述嗜热菌蛋白酶酶解液，取透析液中500-1000Da的组分；

步骤6、将上述500-1000Da的组分经凝胶层析分离，取凝胶层析分离产物中抗氧化活性最高的组分G₁；

步骤7、将上述组分G₁经阴离子交换色谱分离，取抗氧化活性最高的组分H₂。

进一步地，上述步骤2具体为：称取0.4g虾副产物粉，加入到6mL磷酸盐缓冲液中，37℃摇床孵育2h，得到虾副产物总蛋白提取液。

进一步地，上述步骤3具体为：向60mL虾副产物总蛋白提取液中加入24mg 10000U/mgα-胰凝乳蛋白酶，漩涡混匀，在37℃下水解反应4h，90℃下终止水解反应，离心，取上清，得到α-胰凝乳蛋白酶酶解液。

进一步地，上述步骤4具体为：取α-胰凝乳蛋白酶酶解液9.8mL，添加12mg 175U/mL嗜热菌蛋白酶，漩涡混匀，于70℃下水解反应6h，90℃下终止水解反应，得到嗜热菌蛋白酶酶解液。