[发明专利]一种石斛胚状体规模培养方法

权利要求书

1.一种提高石斛胚状体产量的体外规模化悬浮培养扩增石斛胚状体方法，其培养过程是将胚状体种子按一定接种比例接种到生物反应器中，通过调节氧含量在30-50％之间，pH为5-7，固定光源光照10-20h，光照强度2000-8000Lx，培养分阶段进行，每一阶段为10-25天，不同阶段的光质交替变换，所述的光质为红蓝光，所述的交替变换为红蓝光比例由第一阶段的2-3:4-5调整为第二阶段的3-4:4-6，再由第二阶段的3-4:4-6调整为第三阶段的2-3:4-5，并以此模式循环；每阶段更换新鲜液体培养基一次。每15-25天收获石斛胚状体培养物的30-50％，并补充相应比例的新鲜液体培养基，培养持续进行；所述液体培养基为基本培养基中添加植物生长调节剂，植物生长调节剂为生长素、细胞分裂素的组合或生长素、细胞分裂素与ABA的组合，生长素与细胞分裂素比例控制在3:1，总浓度在0.05-5mg/L调整。

2.根据权利要求1所述的方法，所述基本培养基为MS、1/2MS、1/4MS、B5、N6、NLN、White或SH培养基。

3.根据权利要求1所述的方法，所述的液体培养基与更换的新鲜液体培养基中的植物生长调节剂相同，均为IAA/NAA/IBA 0.05-3mg/L:6-BA/KT/ZT0.05-3mg/L，总浓度为0.05-5mg/L。

4.根据权利要求1所述的方法，优选的，更换的新鲜液体培养基中植物生长调节剂为IAA/NAA/IBA 0.05-3mg/L:KT 0.05-3mg/L:ABA 0.05-50ug/L，总浓度为0.05-5mg/L。

5.一种提高石斛胚状体产量的体外规模化悬浮培养扩增石斛胚状体方法，其特征在于：培养过程是将胚状体种子按一定接种比例接种到生物反应器中，通过调节氧含量在30-50％之间，酸碱度在5-7之间，固定光源光照10-20h，光照强度2000-8000Lx，培养分阶段进行，每一阶段为10-25天，不同阶段的光质交替变换，所述的光质为红蓝光，所述的交替变换为红蓝光比例由第一阶段的2-3:4-5调整为第二阶段的3-4:4-6，再由第二阶段的3-4:4-6调整为第三阶段的2-3:4-5，并以此模式循环；每阶段更换培养基一次。每15-25天收获石斛胚状体培养物的30-50％，并补充相应比例的新鲜培养液，培养周期结束后将培养物全部收获；所述培养基中添加适当的植物生长调节剂，植物生长调节剂为生长素、细胞分裂素的组合或生长素、细胞分裂素与ABA的组合，生长素与细胞分裂素比例控制在3:1，总浓度在0.05-5mg/L调整。

6.根据权利要求5所述的方法，所述基本培养基为MS、1/2MS、1/4MS、B5、N6、NLN、White或SH培养基。

7.根据权利要求5所述的方法，所述的液体培养基与更换的新鲜液体培养基中的植物生长调节剂相同，均为IAA/NAA/IBA 0.05-3mg/L:6-BA/KT/ZT0.05-3mg/L，总浓度为0.05-5mg/L。

8.根据权利要求5所述的方法，优选的，更换的新鲜液体培养基中植物生长调节剂为IAA/NAA/IBA 0.05-3mg/L:KT 0.05-3mg/L:ABA 0.05-50ug/L，总浓度为0.05-5mg/L。