[发明专利]用于鉴定脂肪间充质干细胞的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种试剂盒，尤其是一种用于鉴定脂肪间充质干细胞的试剂盒。

背景技术

目前越来越多的研究将脂肪分离间充质干细胞用于临床，脂肪间充质干细胞的发展前景也越来越好。国际细胞治疗协会(ISCT)规定间充质干细胞的鉴定包括形态学、流式表型和诱导分化能力三个方面。传统的间充质干细胞鉴定方法已经比较成熟，但是诱导分化过程中耗时较长，而且诱导效率较低，影响最终细胞鉴定结果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种提高诱导分化效率，缩短诱导分化时间的用于鉴定脂肪间充质干细胞的试剂盒。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种用于鉴定脂肪间充质干细胞的试剂盒，包括流式表型检测试剂套装、细胞固定液、普通培养基、成脂分化诱导及检测试剂套装、成骨分化诱导及检测试剂套装、成软骨分化诱导及检测试剂套装；

所述流式表型检测试剂套装：包括CD73抗体、CD90抗体、CD105抗体、CD34抗体、CD45抗体、CD49d抗体、CD106抗体、IgG1抗体，每只均为200uL；

所述成脂分化诱导及检测试剂套装：包括100mL成脂诱导培养基和10mL成脂分化检测试剂，成脂诱导培养基为含有0.2-2mmoL/L谷氨酰胺、1-20μg/mL IGF-2、2-5mmol/L 3-磷酸甘油、0.25-1mmoL/L倍氯米松、0.1-0.5mmoL/L异丁基甲基黄嘌呤、100-200μmoL/L吲哚美辛、1-50μmoL/L乙酰CoA、体积分数2-10％胎牛血清的AMEM培养基；

所述成骨分化诱导及检测试剂套装：包括100mL成骨诱导培养基和10mL成骨分化检测试剂，成骨诱导培养基为含有0.5-2mmoL/L谷氨酰胺、0.5-2mmoL/L倍氯米松、5-20μg/mL TGF-β、2-10mmol/Lβ-甘油磷酸钠、15-25mmol/L维生素D3、20-30mmol/L维生素C、体积分数2-10％胎牛血的AMEM培养基；

所述成软骨分化诱导及检测试剂套装：包括100mL成软骨诱导培养基和10mL成软骨分化检测试剂，成软骨诱导培养基为含有5-10ng/ml TGF-β1、20-50mg/L维生素C、10-20nmol/L倍他米松、50-100mg/ml ITS、10-60mmol/L氨基葡萄糖、1-20mmol/L丙酮酸钠、2-10ug/mg亚油酸、1-8ng/ml人血清白蛋白、10-20mmol/Lβ-甘油磷酸钠、体积分数2-10％胎牛血清的AMEM培养基。

所述细胞固定液为20mL质量百分比浓度4％多聚甲醛的水溶液。

所述普通培养基为20mL含体积分数2-8％胎牛血清的AMEM培养基。

所述成脂分化检测试剂为含有1g/L茜素磺酸钠水溶液。

所述成骨分化检测试剂为含有质量体积分数为0.5％油红O的异丙醇溶液。

所述成软骨分化检测试剂为含有10g/L阿尔新兰、质量体积分数3％醋酸的水溶液。

本发明的有益效果是：提高诱导分化效率，缩短诱导分化的时间，传统成骨、成脂诱导分化通常需要大约24天，时间较长且诱导效率较低，本发明将成骨、成脂诱导分化时间缩短至18天；同时传统流式检测大多只针对间充质干细胞通用的表面标志，而脂肪间充质干细胞具有不同于其他来源间充质干细胞的阳性表达的表面标志CD49d和阴性表达的CD106，本发明试剂盒中增加了CD49d抗体和CD106抗体，从而得出更为准确的鉴定结果。

附图说明

图1流式检测结果图。

图2成脂分化染色图。

图3成骨分化染色图。

图4成软骨分化染色图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明：

本发明的用于鉴定脂肪间充质干细胞的试剂盒，包括流式表型检测试剂套装、细胞固定液、普通培养基、成脂分化诱导及检测试剂套装、成骨分化诱导及检测试剂套装、成软骨分化诱导及检测试剂套装；

所述流式表型检测试剂套装：包括CD73抗体、CD90抗体、CD105抗体、CD34抗体、CD45抗体、CD49d抗体、CD106抗体、IgG1抗体，每只均为200uL；