[发明专利]一种采用高效液相色谱法检测乳中克拉维酸的方法及应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种采用高效液相色谱法检测乳中克拉维酸的方法及应用，属于食品检测技 术领域。

背景技术

克拉维酸(clavulanicacid)属氧青霉烷类物质，是链霉菌的代谢产物，分子是一个稠合双 环的β-内酰胺结构。其自身的抗菌能力较弱，但药效广谱，是强力不可逆的竞争性β-内酰 胺酶抑制剂，可以与β-内酰胺酶结合后使其失活，具有抑制革兰氏阳性菌和阴性菌的作用。

抗生素的大量应用，导致其在乳中的残留问题受到广泛关注。为了躲避抗生素的检出， 有些人在乳中添加β-内酰胺酶，用以降解抗生素，从而无法判断乳中是否含有抗生素。所以， 针对这一现象，建立了关于乳中β-内酰胺酶的检测方法。但是，有些人又利用β-内酰胺酶 抑制剂能不可逆地与β-内酰胺酶结合的性质，在乳中添加β-内酰胺酶抑制剂，使β-内酰胺 酶失去活性，导致阳性奶不能被检测出来。

关于乳中β-内酰胺酶抑制剂的检测方法在国内外还没有现行的检测标准发布，国外由于 其文化发展程度的差异，主要将目标放在临床医疗中的使用情况，并没有看到克拉维酸在乳 中的报道；而国内对于克拉维酸的检测方法的报道很少，文献报道的方法又主要集中在微生 物法、酶法、毛细管电泳法等。

由于目前尚无良好有效的检测手段，建立乳中β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸的检测方法非 常重要。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种采用高效液相色谱法检测乳中克拉维酸的方 法，采用的技术方案如下：

本发明的目的在于提供一种采用高效液相色谱法检测乳中β-内酰胺酶抑制剂克拉维酸 的方法，该方法步骤如下：

1)将样品进行前处理；

2)按照如下色谱条件利用高效液相色谱进行测定；所述色谱条件为：色谱柱为C18色谱 柱；检测波长为210nm-220nm；流动相为磷酸二氢钾溶液-甲醇；流速为0.7mL/min-1.2 mL/min；进样量为10μL；洗脱时间为10min。

优选地，所述前处理，是称取1份牛奶与乙腈混合，震荡混匀后离心，取上清液与正己 烷混合，震荡混匀后离心，弃去正己烷层，氮气吹干后，用流动相复溶，最后过微孔滤膜。

优选地，所述磷酸二氢钾溶液浓度为0.0125mol/L-0.05mol/L；pH为4-5。

更优选地，所述磷酸二氢钾溶液浓度为0.025mol/L；pH为4.5。

优选地，所述磷酸二氢钾溶液-甲醇，体积比为95:5-90:10。

更优选地，所述磷酸二氢钾溶液-甲醇，体积比为95:5。

优选地，所述C18色谱柱，规格为4.6mm×250mm，5μm。

优选地，具体步骤如下：

1)将样品进行前处理：称取1份牛奶与3份-5份乙腈混合于离心管中，震荡混匀后离心，取上 清液与4份-6份正己烷混合于另一离心管中，震荡混匀后离心，弃去正己烷层，在35℃-45℃ 氮气吹干后，用流动相复溶，最后过微孔滤膜；

2)按照如下色谱条件利用高效液相色谱进行测定；所述色谱条件为：色谱柱为4.6mm×250 mm，5μm的C18色谱柱；检测波长为210-220nm；流动相为体积比为95:5-90:10的磷酸 二氢钾溶液-甲醇；流速为0.7mL/min-1.2mL/min；进样量为10μL；洗脱时间为10min； 所述磷酸二氢钾溶液浓度为0.0125mol/L-0.05mol/L，pH为4-5。

更优选地，具体步骤如下：

1)将样品进行前处理：称取1份牛奶与4份乙腈混合于离心管中，震荡混匀后离心，取上清 液与5份正己烷混合于另一离心管中，震荡混匀后离心，弃去正己烷层，在40℃氮气吹干 后，用流动相复溶，最后过微孔滤膜；

2)按照如下色谱条件利用高效液相色谱进行测定；所述色谱条件为：色谱柱为4.6mm×250 mm，5μm的C18色谱柱；检测波长为217nm；流动相为体积比为95:5的磷酸二氢钾溶液 -甲醇；流速：1.0mL/min；进样量为10μL；洗脱时间为10min；所述磷酸二氢钾溶液浓 度为0.025mol/L，pH为4.5。

以上所述任一方法在检测克拉维酸中的应用。