[发明专利]伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）对照品溶液的准备：原儿茶酸标准品，加入甲醇定容，制得参照物溶液；

（2）供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加水溶解，加稀盐酸调节pH，搅匀，静置，滤过，加水饱和正丁醇萃取3~6次，分取出正丁醇提取液，合并正丁醇提取液，静置，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇溶解，离心，取上清液，得供试品溶液；

（3）高效液相色谱仪的色谱条件：

色谱柱：Phenomenex Gemini C18柱，4.6mm×250mm，5μm；

保护柱：Phenomenex C18，4×3.0mm；

流动相：甲醇-0.1%冰乙酸；

梯度洗脱程序：时间梯度0min→11min→16min→29min→30min→35min→45min→55min→70min→95min；对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相B0.1％冰乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度5％→16％→17％→30％→34％→34％→35％→45％→45％→70％，流动相B的体积百分数梯度95％→84％→83％→70％→66％→66％→65％→55％→55％→30％；

紫外检测波长：256nm；

流速：1.0mL·min^-1；

柱温：25℃；

（4）测定：吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照步骤（3）的色谱条件测定，得到指纹图谱；

所述指纹图谱共有色谱峰21个，其平均保留时间分别为：

1号峰3.234min、2号峰5.962min、3号峰11.023min、4号峰15.353min、5号峰16.521min、6号峰24.498min、7号峰27.158min、8号峰30.877min、9号峰32.29min、10号峰34.752min、11号峰36.182min、12号峰37.968min、13号峰38.708min、14号峰56.509min、15号峰58.989min、16号峰59.670min、17号峰66.895min、18号峰68.358min、19号峰69.319min、20号峰85.217min、21号峰91.016min；

所述伊血安颗粒的组分包括滇桂艾纳香、益母草、延胡索和甘草，其中1号峰~21号峰来源于滇桂艾纳香，9号峰来源于益母草，10、11号峰来源于延胡索，6、14、15、16号峰来源于甘草。

2.根据权利要求1所述的伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：

所述步骤（2）的具体操作方法为：称取伊血安颗粒3~8g，加水50mL溶解，加稀盐酸0.2~0.4mL，搅匀，静置15~30min，滤过，加水饱和正丁醇萃取5~6次，每次15~20mL，分取正丁醇提取液，合并，静置1~1.5h，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇4~6mL，离心，取上清液，得供试品溶液。

3.根据权利要求1所述的伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：

所述步骤（3）中，理论塔板数以原儿茶酸峰计，不低于5000。

4.根据权利要求2所述的伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：

称取伊血安颗粒5g，加水50mL溶解，加稀盐酸0.3mL，搅匀，静置20min，滤过，加水饱和正丁醇萃取5次，每次15mL，分取正丁醇提取液，合并，静置1h，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇5mL，离心，取上清液，得供试品溶液。

5.根据权利要求1所述的伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，其特征在于：

所述对照品溶液是浓度为0.081mg·mL^-1的原儿茶酸标准品溶液。