[发明专利]伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法

说明书

技术领域

本发明涉及药物检测领域，特别是一种伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法。

背景技术

伊血安颗粒是一种治疗妇科血症的中成药，主要成份为益母草、益母草、延胡索、甘草等，具有活血止血、行气止痛等功效。临床上用于产后恶露不绝，人工流产后子宫出血不净，中医辩证属血瘀证者。

随着近年来新技术、新方法的运用，中药复方研究出现了许多新思路，用指纹图谱研究中药复方就为其中之一，指纹图谱对中药复方进行质量控制研究、提供质量控制标准具有重要意义。但目前对伊血安颗粒的指纹图谱建立方法研究还比较少。

授权公告号为CN104458993B的发明专利，公开了一种壮药材滇桂艾纳香HPLC指纹图谱的建立方法，以滇桂艾纳香中的主要成分原儿茶酸和原儿茶醛为参照物，采用高效液相色谱仪检测获得了壮药滇桂艾纳香药材共有模式的指纹图谱，指纹图谱共有色谱峰13个，该方法能快速、准确地鉴别滇桂艾纳香的真伪优劣，为控制药材质量和鉴别药材优劣提供了有力的理论依据。但上述发明仅是针对伊血安颗粒的其中一种原料药建立了指纹图谱，伊血安颗粒包含多种原料药，为提高伊血安颗粒中药复方的质量控制水平，极有必要建议一种伊血安颗粒的指纹图谱。

发明内容

本发明提供了一种伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，显示了伊血安颗粒中各成分的组分与比例，为伊血安颗粒的质量控制提供了重要参考。

为实现上述目的，本发明的技术方案为：

一种伊血安颗粒HPLC指纹图谱的建立方法，包括以下步骤：

(1)对照品溶液的准备：原儿茶酸标准品，加入甲醇定容，制得参照物溶液。

(2)供试品溶液的准备：取伊血安颗粒，加水溶解，加稀盐酸调节pH，搅匀，静置，滤过，加水饱和正丁醇萃取3～6次，分取出正丁醇提取液，合并正丁醇提取液，静置，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇溶解，离心，取上清液，得供试品溶液。

(3)高效液相色谱仪的色谱条件：

流动相：甲醇-0.1％冰乙酸；

梯度洗脱程序：时间梯度

0min→11min→16min→29min→30min→35min→45min→55min→70min→95min；对应的梯度洗脱液按以下体积比由流动相A甲醇和流动相B0.1％冰乙酸组成，流动相A的体积百分数梯度5％→16％→17％→30％→34％→34％→35％→45％→45％→70％，流动相B的体积百分数梯度95％→84％→83％→70％→66％→66％→65％→55％→55％→30％；

紫外检测波长：256nm；

流速：1.0mL·min^-1；

柱温：25℃。

(4)测定：吸取供试品溶液注入高效液相色谱仪，按照步骤(3)的色谱条件测定，得到指纹图谱。

优选的，所述步骤(2)的具体操作方法为：称取伊血安颗粒3～8g，加水50mL溶解，加稀盐酸0.2～0.4mL，搅匀，静置15～30min，滤过，加水饱和正丁醇萃取5～6次，每次15～20mL，分取正丁醇提取液，合并，静置1～1.5h，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇4～6mL，离心，取上清液，得供试品溶液。更优选的，称取伊血安颗粒5g，加水50mL溶解，加稀盐酸0.3mL，搅匀，静置20min，滤过，加水饱和正丁醇萃取5次，每次15mL，分取正丁醇提取液，合并，静置1h，分取获得正丁醇液，回收正丁醇，残渣加甲醇5mL，离心，取上清液，得供试品溶液。

进一步的，所述指纹图谱共有色谱峰21个，其平均保留时间分别为：1号峰3.234min、2号峰5.962min、3号峰11.023min、4号峰15.353min、5号峰16.521min、6号峰24.498min、7号峰27.158min、8号峰30.877min、9号峰32.29min、10号峰34.752min、11号峰36.182min、12号峰37.968min、13号峰38.708min、14号峰56.509min、15号峰58.989min、16号峰59.670min、17号峰66.895min、18号峰68.358min、19号峰69.319min、20号峰85.217min、21号峰91.016min。更进一步的，所述伊血安颗粒的组分包括滇桂艾纳香、益母草、延胡索和甘草，其中1号峰～21号峰来源于滇桂艾纳香，9号峰来源于益母草，10、11号峰来源于延胡索，6、14、15、16号峰来源于甘草。