[发明专利]TCRβ链互补决定区的处理方法

权利要求书

1.一种TCRβ链互补决定区的处理方法，其特征在于，包括以下步骤：

设置实验组与对照组，每组包括若干份相异人体的已经脱离人体的外周血标本；

分离各所述外周血标本的淋巴细胞，并分别提取所述外周血标本淋巴细胞中的DNA；

采用多重PCR技术，构建DNA文库；

对所述DNA文库进行高通量测序，对所述实验组及对照组中的TCRβ链互补决定区进行数据分析。

2.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，采用多重PCR技术之前，所述处理方法还包括测定DNA的含量以及检测DNA完整性的步骤。

3.根据权利要求2所述的处理方法，其特征在于，采用荧光分析法测定DNA的含量。

4.根据权利要求2所述的处理方法，其特征在于，用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA完整性。

5.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，利用Illumina MiSeq平台对DNA文库进行高通量测序。

6.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，采用多重PCR技术，构建DNA文库，其具体包括：

计算所述实验组及对照组中DNA的取用量，称取，并加入V区引物及J区引物进行多重PCR；

电泳检测回收多重PCR产物；

加入末端修护混合液进行末端修护反应，并纯化；

将纯化后的产物在3’端连上A碱基；

在接头连接反应体系中进行接头连接；

通过PCR反应富集经过接头修饰的DNA片段，并对PCR产物进行琼脂糖凝胶电泳，切取目的片段后，纯化回收，得到DNA文库。

7.根据权利要求6所述的处理方法，其特征在于，构建DNA文库后，还 包括检测所述DNA文库的插入片段范围及对所述DNA文库的浓度进行定量。

8.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，对所述实验组及对照组中的TCRβ链互补决定区进行数据分析包括：对测序数据进行质控和预处理、对数据进行比对分析、对序列结构进行分析、构建免疫组库及对免疫组库进行差异分析。

9.根据权利要求8所述的处理方法，其特征在于，对测序数据进行质控和预处理包括：对测序后的数据进行过滤处理。

10.根据权利要求1所述的处理方法，其特征在于，采用Ficoll密度梯度离心法分离出所述外周血标本的淋巴细胞。