[发明专利]一种HPLC法分析分离顺式双环[3,2,0]庚‑2‑烯‑6‑酮对映异构体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种色谱分析方法，尤其是一种分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的高效液相色谱法。

技术背景

前列腺素是一类重要的内源性生理活性物质，在激素浓度水平上调节人体多种生理作用，对血压、平滑肌收缩、胃液分泌及血小板凝聚有调节作用。前列腺素是广泛存在于人和动物各组织中的微量成分，含量极低，天然来源的前列腺素不能满足临床用药需求。为此，前列腺素类衍生物的全合成研究至关重要。

顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮是一种合成前列腺素类药物的重要中间体，其分子式为C₇H₈O，英文名为：(+/-)-cis-Bicyclo[3.2.0]hept-2-en-6-one。结构式为:

该分子有2个手性中心，根据立体结构及反应机理推断，存在2个对映异构体，其中1个作为异构体杂质在后续步骤中参与反应，进而形成多种对应杂质，严重影响前列腺素类药物的质量，这也是该类药物临床用药引起不良反应的重要因素之一。因此，如何分析分离该对对映异构体，进而控制前列腺素类药物质量，是目前需要解决的技术问题。

近年来，随着手性色谱填料多样化，手性色谱柱液相色谱法应用日益广泛，但是，使用手性色谱柱高效液相方法分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体却少有报道。

因此，有必要建立一种分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的HPLC方法，能够有效分析分离该对对映异构体，有效控制杂质含量，提高该目标产物纯度，进而提高前列腺素类药物质量，保证该类药物临床用药安全。

发明内容

本发明的目的是为了克服现有技术的不足，提供一种采用手性色谱柱以正向混合溶剂为流动相的HPLC方法，该方法能够简单、准确、高效分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体，从而实现对顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的质量控制,同时也可以用来制备高纯度的顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体。

本发明的目的是通过以下方案实现的：

一种HPLC法分析分离顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的方法，采用手性色谱柱并使用正相色谱法分析分离。

本发明所述的手性色谱柱为多糖衍生物正相涂覆型手性色谱柱，硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)或直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]。

本发明的正相色谱法所用的流动相为正己烷-异丙醇混合溶剂。

进一步地，本发明所使用的正己烷-异丙醇的体积比例为87:13～99:1，最优为90:10～95:5。

本发明的正相色谱法所用的流动相为正己烷-无水乙醇混合溶剂。

进一步地，本发明所选用的正己烷-无水乙醇体积比例为85:15～98:2，最优为90:10～96:4。

本发明所述的分析分离方法，可按照以下方法实现：

(1)顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体供试品用流动相溶解，配制成1mL含顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体1～10μL的供试品溶液；进样量是1～20μL，较优选的是5～10μL。

(2)设置流动相流速为0.4～1.5mL/min，优选为0.5～1mL/min；检测波长为205～220nm，较优选为210nm；柱温14～50℃，较优选的是18～40℃。

(3)取步骤(1)所制供试品溶液5～10μL注入液相色谱仪，完成顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体的分析与分离。

实验结果表明，与正相硅胶色谱柱、反相硅胶色谱柱、氰基柱等非手性色谱柱相比，本发明所采用的手性色谱柱具有更优的分离效果。

与OD-H纤维素手性色谱柱相比，本发明直链淀粉类手性色谱柱因其手性填料的特异性，能够将顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体简单、快速的分离，从而可以准确控制目标物纯度及其对映异构体杂质含量。

本发明采用手性色谱柱为直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)手性色谱柱具体为Chiralpak AD-H(250×4.6mm,5.0μm)，对顺式双环[3,2,0]庚-2-烯-6-酮对映异构体有较好的分析分离效果。

本发明流动相较优选的是正己烷/异丙醇混合溶剂，混合溶剂的体积比例为87:13～99:1，较优选为90:10～95:5；