[发明专利]一种瑞加诺生有关物质的高效液相色谱分析方法有效
| 申请号： | 201610323684.8 | 申请日： | 2016-05-15 |
| 公开（公告）号： | CN105866290B | 公开（公告）日： | 2018-04-24 |
| 发明（设计）人： | 徐丽;闵涛;曹卫;王继芳;刘婷婷 | 申请（专利权）人： | 南京海融医药科技股份有限公司;南京海美生物医药有限公司 |
| 主分类号： | G01N30/02 | 分类号： | G01N30/02;G01N30/34;G01N30/60;G01N30/89 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 211100 江苏省南京市江宁区科学*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 瑞加诺生 有关 物质 高效 色谱 分析 方法 | ||
1.一种检测瑞加诺生有关物质的高效液相色谱分析方法，其特征在于，包含如下步骤：
(1)色谱条件设置：采用反相C18柱是Agilent C18色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，填料粒径5μm；
洗脱液由流动相A和流动相B构成，流动相A为1-戊烷磺酸钠的磷酸盐缓冲体系，所述1-戊烷磺酸钠的浓度为15mmol/L；缓冲体系中磷酸的浓度为0.02mol/L，用氢氧化钠调节pH为4.2；流动相B为甲醇；
梯度洗脱程序是：0min-40min，流动相A占洗脱液的体积百分比由90％逐步递减至55％；40min-50min，流动相A占洗脱液的体积百分比由55％逐步递减至40％；50min-50.01min，流动相A占洗脱液的体积百分比由40％直接转换为90％；50.01min-60min，流动相A占洗脱液的体积百分比90％；
柱温为35℃，流速为1.0ml/min，检测波长为247nm；
(2)供试品溶液制备：取瑞加诺生原料药或注射液适量，配制成浓度为0.01-1.0mg/ml的瑞加诺生溶液；
(3)对照溶液制备：精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用洗脱液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
(4)系统适应性溶液制备：分别取瑞加诺生对照品、杂质D对照品、杂质G对照品、杂质A对照品、杂质I对照品、杂质H对照品、杂质J对照品、杂质F对照品各适量，加甲醇溶解，并用稀释剂制成每1ml中各含约0.4μg的溶液，作为系统适应性溶液；
(5)检测：精密量取系统适应性溶液20μl，注入液相色谱仪，各杂质峰之间的分离度应符合要求；再精密量取对照溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；其中，各杂质的化学结构如下所示，
2.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，该方法是一种检测瑞加诺生原料药的有关物质的分析方法，具体包含如下步骤：
(a)色谱条件设置：采用反相C18柱是Agilent C18色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，填料粒径5μm；
洗脱液由流动相A和流动相B构成，流动相A为1-戊烷磺酸钠的磷酸盐缓冲体系，所述1-戊烷磺酸钠的浓度为15mmol/L；缓冲体系中磷酸的浓度为0.02mol/L，用氢氧化钠调节pH为4.2；流动相B为甲醇；
梯度洗脱程序是：0min-40min，流动相A占洗脱液的体积百分比由90％逐步递减至55％；40min-50min，流动相A占洗脱液的体积百分比由55％逐步递减至40％；50min-50.01min，流动相A占洗脱液的体积百分比由40％直接转换为90％；50.01min-60min，流动相A占洗脱液的体积百分比90％；
柱温为35℃，流速为1.0ml/min，检测波长为247nm；
(b)供试品溶液制备：取瑞加诺生原料药约10mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇8ml使之溶解，并用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；
(c)对照溶液制备：精密量取1ml，置100ml量瓶中，用洗脱液稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
(d)系统适应性溶液制备：分别取瑞加诺生对照品、杂质D对照品、杂质G对照品、杂质A对照品、杂质I对照品、杂质H对照品、杂质J对照品、杂质F对照品各适量，加甲醇溶解，并用稀释剂制成每1ml中各含约0.4μg的溶液，作为系统适应性溶液；
(e)检测：精密量取系统适应性溶液20μl，注入液相色谱仪，各杂质峰之间的分离度应符合要求；再精密量取对照溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；其中，各杂质的化学结构如下所示，
3.根据权利要求1所述的高效液相色谱分析方法，其特征在于，该方法是一种检测瑞加诺生注射液的有关物质的分析方法，且注射液规格为0.4mg/5mL，具体包含如下步骤：
(I)色谱条件设置：采用反相C18柱是Agilent C18色谱柱，柱长250mm，内径4.6mm，填料粒径5μm；
洗脱液由流动相A和流动相B构成，流动相A为1-戊烷磺酸钠的磷酸盐缓冲体系，所述1-戊烷磺酸钠的浓度为15mmol/L；缓冲体系中磷酸的浓度为0.02mol/L，用氢氧化钠调节pH为4.2；流动相B为甲醇；
梯度洗脱程序是：0min-40min，流动相A占洗脱液的体积百分比由90％逐步递减至55％；40min-50min，流动相A占洗脱液的体积百分比由55％逐步递减至40％；50min-50.01min，流动相A占洗脱液的体积百分比由40％直接转换为90％；50.01min-60min，流动相A占洗脱液的体积百分比90％；
柱温为35℃，流速为1.0ml/min，检测波长为247nm；
(II)供试品溶液制备：取瑞加诺生注射液，浓度为0.4mg/5mL，作为供试品溶液；
(III)对照溶液制备：精密量取1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；
(IV)系统适应性溶液制备：分别取瑞加诺生对照品、杂质D对照品、杂质G对照品、杂质A对照品、杂质I对照品、杂质H对照品、杂质J对照品、杂质F对照品各适量，加甲醇溶解，并用稀释剂制成每1ml中各含约0.4μg的溶液，作为系统适应性溶液；
(V)检测：精密量取系统适应性溶液20μl，注入液相色谱仪，各杂质峰之间的分离度均应符合要求；再精密量取对照溶液和供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；其中，各杂质的化学结构如下所示，
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