[发明专利]一种瑞加诺生有关物质的高效液相色谱分析方法

说明书

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种瑞加诺生有关物质的高效液相色谱分析方法。

背景技术

瑞加诺生（Regadenoson），化学名称1-(6-氨基-9-((2S,3R,4S,5R)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃环-基)-9H-嘌呤-2-基)-N-甲基-1H-吡唑-4-甲酰胺一水合物，结构式如下所示，

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瑞加诺生（Regadenoson，商品名Lexiscan）是CV Therapeutics公司开发的一种选择性腺苷受体激动剂，可使冠状动脉产生舒张。这款药物用于不能接受运动压力测试患者的放射性核素心肌灌注显像。临床医师也超适用症将其用于CT影像。

瑞加诺生杂质较多，从来源看，瑞加诺生的杂质主要来源于合成过程中引入的反应原料、合成中间体、反应副产物及降解杂质，瑞加诺生制剂的杂质来源于原料引入杂质、工艺杂质及降解杂质。

目前瑞加诺生原料及其制剂的分析方法主要依赖于精密的仪器和复杂的研究。美国、欧洲、日本等国药典中未收载瑞加诺生质量标准，对于瑞加诺生有关物质或质量研究的文献较少。文献“中国医药工业杂志，2015，46（7）：683-686”报道了两种诺加诺生的有关物质，文中记为有关物质A和有关物质B，如下所示，

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该篇文献报道的有关物质数量有限，且不全面。本发明人通过重复试验条件后发现，其公开的液相条件和分析方法只能局限于检到瑞加诺生质量分析中的极个别杂质。也即本发明所述杂质在上述条件下无法有效地分离分析，更无法准确定量测定这些潜在的杂质，给瑞加诺生的用药安全带来很大风险。

发明内容

本发明的目的在于提供一种瑞加诺生有关物质的高效液相色谱分析方法。

针对现有文献对瑞加诺生原料及制剂杂质研究的缺失，发明人通过工艺试制、强制降解试验对瑞加诺生杂质进行富集、分离提纯，具体操作可采用本领域技术人员熟知的富集杂质和分离提纯的方法，例如，增加有机反应的投料量，浓缩收集母液，进行柱层析、重结晶等纯化方式获得的高纯度杂质。

本发明所用瑞加诺生α异构体杂质对照品可以通过增加瑞加诺生合成过程中相关反应的投料量，浓缩收集母液，进行柱层析纯化后得到的高纯度的α异构体杂质。

本发明人总共鉴定了7个主要杂质，并且对杂质进行了溯源归属，包括瑞加诺生合成起始物料（杂质A）、、合成中间体（杂质D、杂质F）、瑞加诺生合成副产物（杂质G、杂质H、杂质I、杂质J），结构分别如下所示，

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其中，文献“中国医药工业杂志，2015，46（7）：683-686”有关物质A就是本发明中的杂质G，有关物质B就是杂质J。本发明首次公开了瑞加诺生的α异构体杂质，即杂质H。现有技术中从未获得过该杂质，更加未出现关于该α异构体杂质的质量分析的文献报道。

发明人曾试图通过等度洗脱分离各杂质，但在保证各杂质达到基线分离的情况下色谱保留时间大于2.5h，耗时，不实用。因此，改用梯度洗脱法，经对流动相组成及比例的优化筛选，最终确定本发明的分析方法。同时按中国药典2015版二部通则0512（高效液相色谱法）及通则9101（药品质量标准分析方法验证指导原则）的定义及验证方法，进行专属性验证。结果表明该方法可同时分析瑞加诺生原料及制剂中的所有杂质，并且可通过加校正因子的主成分自身对照法有效控制各杂质含量，各杂质峰之间及主峰与相邻杂质峰之间的分离度均大于1.5，主峰与各杂质峰峰纯度均为1.0。

所述“峰纯度”是指采用配有相应分析软件的光二极管阵列检测器，采集、记录、分析经色谱柱分离组份的光谱数据，自动生成的表征特定分离组份对应的光谱特征一致性的加权值。

本发明报道了一种瑞加诺生有关物质的高效液相色谱分析方法，采用反相色谱柱及紫外检测器，是以1-烷基磺酸钠溶液-甲醇为流动相，进行梯度洗脱，达到分离分析瑞加诺生各有关物质的目的。

本发明首先涉及应用于分离检测瑞加诺生及其有关物质的试剂组合物，该试剂组合物由如下试剂组成：“试剂A”是加有1-烷基磺酸钠的磷酸盐缓冲体系，所述1-烷基磺酸钠的浓度为1mmol/L-20mmol/L；缓冲体系中磷酸的浓度为0.015-0.055mol/L，用氢氧化钠调节pH为3.9-4.5；“试剂B”是甲醇或乙腈中的一种；其中，所述“1-烷基磺酸钠”选自1-戊烷磺酸钠、1-己烷磺酸钠、1-庚烷磺酸钠中的一种或多种。