[发明专利]一种手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法

权利要求书

1.一种手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法，其特征在于，首先将反应膜 （4）粘贴到背衬（7）中心上，反应膜（4）上喷涂检测线（3）和对照线（5），再将吸水垫（6）压到 反应膜（4）靠近背衬末端的一侧，胶体金垫（2）压到反应膜（4）的另一侧，样品垫（1）压到胶 体金垫（2）的另一侧，样品垫、胶体金垫、反应膜和吸水垫皆用强力胶固定于背衬上，用切条 机沿背衬横截面方向切成4mm宽的条，将试纸条装在试纸壳（8）内，试纸壳（8）上开有样本孔 （9）和检测结果区（10）；

所述的样品垫（1）是由样品处理液和玻纤膜制成，方法是，由20g牛血清白蛋白、5g曲拉 通-100和0.01mol、pH为7.4的磷酸缓冲液加水至1000ml制成样品处理液，把玻纤膜裁切成 22mm宽的条，然后在每0.8cm长的玻纤膜上喷涂100μL样品处理液，37℃干燥过夜，成样品垫 （1）；

所述的胶体金垫（2）是由玻纤膜上喷涂金标抗体液制成，方法是，将玻纤膜裁切成7mm 宽的条，每1.7cm长的玻纤膜上喷涂100μL金标抗体液，冷冻真空干燥或加入干燥剂晾干，再 密闭在密闭容器中静置12小时，即成胶体金垫（2）；

金标抗体液的制备，方法是：

1）胶体金稀释液的配制，胶体金稀释液是由10g牛血清白蛋白、25g蔗糖、0.5g吐温-20、 1g叠氮钠和0.01mol、pH为7.4的磷酸缓冲液加水至1000mL制成；

2）胶体金颗粒溶液的配制：取质量浓度为0.01%氯金酸水溶液50ml，微波加热至煮沸， 加入质量浓度为1%柠檬酸三钠水溶液600μL，加热至出现酒红色，再加入50ml、4℃预冷的电 导率为18.25的纯净水，即成40nm胶体金颗粒溶液，胶体金颗粒溶液吸收峰波长为532- 534nm；Abs大于0.400；

3）胶体金标记抗体的配制：取胶体金颗粒溶液10ml，磁力搅拌下，加入体积浓度为30% 的双氧水水溶液32μL；室温磁力搅拌混合10min，再加入0.2M的碳酸钾水溶液300μL，室温磁 力搅拌10min，加入0.2mg纯化冻干的抗手足口病病原单克隆抗体CE-6，抗手足口病病原单 克隆抗体CE-6冻干前缓冲液为0.01M，pH7.4的磷酸缓冲液；室温磁力搅拌60min，加入0.1g 牛血清白蛋白，室温磁力搅拌混匀10min后，再加入0.01g聚乙二醇6000，室温磁力搅拌 30min，得金标抗体，将金标抗体移入离心管，在4℃，用HimacCR21G离心机浓缩，8000rpm离 心10min，弃去上清，得酒红色沉淀，即为胶体金标记抗体；

4）金标抗体液的配制：胶体金标记抗体用胶体金稀释液溶解以置换溶液体系，然后用 胶体金稀释液稀释金标抗体，稀释后的金标抗体最高吸收峰波长532-534nm，吸光度大于 0.400Abs；

所述的检测线（3）和对照线（5）分别是由检测抗体点膜液、对照抗体点膜液喷涂在反应 膜（4）上制成，方法是：

1）配制点膜稀释液：由0.01mol、pH为7.4的磷酸缓冲液，0.15mol氯化钠，10mol乙二胺 四乙酸，1g叠氮钠，30g的甲醇加水至1000mL制成；

2）配制检测抗体点膜液：将纯化冻干的抗手足口病病原单克隆抗体CE-24用点膜稀释 液稀释至2mg/mL，抗手足口病病原单克隆抗体CE-24纯度大于90%，比活性大于10^-5效价/mg 蛋白；

3）配制对照抗体点膜液：将比活性大于10^-7/mg的山羊抗小鼠多抗用点膜稀释液稀释至 0.8mg/mL；

4）制备检测线和对照线：先将反应膜贴到背衬的相应位置，再用点膜机将检测抗体点 膜液及对照抗体点膜液划到反应膜上的相应位置，检测线和对照线的喷制均按每厘米检测 线用2μL点膜液喷制，室温晾干，即成。

2.根据权利要求1所述的手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法，其特征在 于，所述的反应膜（4）的材质是硝酸纤维素膜，型号为：MILLIPORE,M135，制备时将反应膜裁 切成宽度为25mm的条；所述的吸水垫（6）的材质是加厚吸水纸，将加厚吸水纸裁切成宽度为 26mm的条，然后将其粘贴到背衬相应位置上即可。