[发明专利]一种手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及检测试纸，特别是一种手足口病病原胶体金诊断检测试纸盒的制备方 法。

背景技术

手足口病(Handfootandmouthdisease,HFMD)是一种人肠道病毒引起的常见 传染病，该病以手、足和口腔粘膜疱疹或破溃后形成溃疡为主要临床症状。多发生于5岁以 下儿童，可引起手、足、口腔等部位的疱疹，少数患儿可引起心肌炎、肺水肿、无菌性脑膜脑 炎等并发症。个别重症患儿如果病情发展快，导致死亡，给婴幼儿的生命健康带来了巨大威 胁，造成了较严重的社会影响。引发手足口病的肠道病毒有20多种（型），其中以柯萨奇病毒 A16型（CA16）和肠道病毒71型（EV71）最为常见。据卫生部根据各地上报数统计，EV71和CA16 肠道病毒引起的手足口病2011年感染者为162万人，死亡509人；2012年感染者216.9万人， 死亡567人，呈逐年上升的趋势。手足口病近年在全国多个省、市的流行越发强势，疾病预防 控制形势不容乐观。

由于EV71和CA16病毒在人群中隐性感染者广泛存在，具有传播途径不易切断、重 症病例病死率高的特性，近年来，EV71和CA16疫情在全国流行范围逐渐扩大，并且有向成人 发展的趋势。积极采取手足口病的早诊断、早治疗等防治措施可明显降低病死率。因此手足 口病病原快速检测试剂市场巨大。在探寻和建立手足口病病原（EV71和CA16）诊断试剂盒方 面，国内外研究人员都进行了大量工作。2010年，昆明理工大学生命科学与技术学院与北京 科兴生物制品有限公司研发中心建立EV71抗原双抗体夹心ELISA定量检测方法，探索检测 样本中EV71抗原含量的可能。同年，谢靖婧报告研制出了早期快速检测肠道病毒71型抗体 的ELISA血清学诊断试剂盒。2011年，深圳国际旅行卫生保健中心发明公开了一种咽拭子标 本手足口病EV71病毒RT-PCR检测试剂盒及其检测方法。2012年，北京庄笛浩禾生物医学科 技有限公司提供一种结合单克隆抗体，应用双抗体夹心法，检测标本中EV71的快速检测试 纸条。2012年，北京万泰生物药业股份有限公司建立柯萨奇病毒A组16型（CA16）抗原的双抗 体夹心ELISA定量检测方法。但至今，以上研究的检测方法都因为本身的敏感性和特异性等 的原因没能推向市场。

目前，实时荧光定量PCR方法是检测手足口病灵敏度和准确率都比较高的方法，该 方法在许多国家和地区已经是鉴定手足口病阳性病例的确诊性方法。然而，由于核酸检测 第二天才能出结果，且需要一定的检测条件，不适合中小医院临床诊断使用，很多患儿在这 些医院仅靠临床表现判定患者是否患有手足口病就进行治疗，并不上报卫生部。只有在规 模较大的疾病预防控制中心，才能使用PCR技术对患儿进行确诊。实时荧光定量PCR方法的 实验检测条件限制了该方法只能用于手足口病的最终实验室确定性检测。但是而敏感度、 准确率低于实时荧光定量PCR技术的免疫胶体金技术、酶联免疫检测（ELISA）技术等方法由 于操作简便、成本低廉、对实验条件要求低等特点被广泛应用在手足口病检测的第一线。

由于市场上查抗体的ELISA诊断试剂盒结果波动较大，敏感性较低，而且检测需要 6～8小时以上出结果，基层的乡镇卫生院和社区医院多数也不具备进行该项检测的条件。 此外，目前国内市场上生产手足口病检测试剂盒主要检测的是患儿血清中的抗体或粪便和 咽试子中的病毒核酸。对于患儿来讲，抽血采集血清标本是一件非常困难的事；病毒核酸检 测方法特异性强、敏感性高，但是该方法对仪器、技术和环境要求较高，易形成污染和出现 假阳性，更重要的是该方法的取材和处理需要在P2实验室中进行一般医院检验科都不具备 该条件，大大限制了其应用，如果标本处理不够严格，反而增大了疫情扩散的可能性。

因此，研制满足国家传染病防控重大需求，提升突发传染病应急处置能力，同时带 动传染病诊断试剂产业的发展和快速检测试剂盒研发技术链的成熟和发展，亟需一种方 便、快捷、操作简单的手足口病抗原（EV71和CA16）检测试剂盒，但至今未见有公开报导。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一种手足口病病 原胶体金诊断检测试纸盒的制备方法，可有效解决现有技术检测敏感度低，准确率低，容易 出现漏检，标本采集困难的问题。