[发明专利]一种肠易激综合症标志物CdtB抗体检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种肠易激综合症以CdtB抗体为识别物的干式免疫荧光试剂盒及诊断方法，本发明属于医疗产品领域。

背景技术

肠易激综合症(Irritablebowelsyndrome，IBS)是一种常见的慢性胃肠道疾病，以腹痛、腹部不适和排便习惯改变为主要特征，常持续存在或反复发作，经检查可以排除引起这些症状的器质性疾病，目前认为本病是一种功能性肠道疾病。在西方国家IBS发病率为10%-15%，而在中国由于地域，人种不同，各地发病率有所不同，北京地区的发病率为0.82%，广州地区则为5.6%。根据大便的性状将IBS分为便秘型IBS(IBS-C)，腹泻型IBS(IBS-D)和混合型(IBS-M)，各型之间可以相互转换，以IBS-C和IBS-M型之间转换为多见。

IBS的发病机制至今尚不明确，情绪因素、饮食、药物或激素均可引起胃肠道张力改变，促发或加重IBS。情绪焦虑、抑郁等精神因素和心理因素常引起IBS症状的发作和反复。近年来对IBS的发病机制作了进一步地探讨，改变了多年来把IBS一直当成单纯肠动力紊乱的看法，认识到本病具有内脏感觉异常，结肠对刺激的敏感性增高，从而产生腹痛以及腹泻等排便异常的特点，而感觉异常所引起的动力紊乱是受中枢神经调控的。因此，证明中枢神经的状态也能够影响IBS病人的症状。进而有研究表明，给予小剂量选择性5-羟色胺再摄取抑制剂作用于神经中枢，可以减轻IBS病人的症状，及Ringel，Drossman等用15O作PET脑扫描，发现直肠扩张后IBS病人脑血流的图谱与健康人不同；袁耀宗等用功能性磁共振影像学检查也观察到IBS病人与健康人之间存在着脑图的差异。这些都表明神经系统对肠功能具有影响。应激和肠道感染都是重要的发病诱因。Neal等报告对544例细菌性胃肠炎患者追随半年的观察，有25%的患者发生肠功能紊乱。在北京地区对IBS的流行病学调查中发现，痢疾史阳性导致发生本病的危险性上升2倍，其调查表明到有痢疾或肠炎史的IBS患者，其末端回肠、乙状结肠与直肠交界处肠黏膜中炎性介质IL-1βmRNA的表达增高。IL-1βmRNA可抑制肠道水、钠的吸收而产生腹泻，还与迟发性疼痛和过敏有关，它在感染后IBS肠黏膜组织中含量的增高，表明炎症及其随后引起的免疫反应可能参与了IBS的发病机制。

因此可证明神经因素和免疫因素在肠道中之间存在神经免疫机制。在肠黏膜内有着多种能够释放调节介质的免疫细胞，如分泌白细胞介素的单核细胞，分泌组胺、5-HT的肥大细胞和嗜铬细胞等。其中，肥大细胞被认为很可能是在神经和免疫机制之间担当沟通作用的重要免疫细胞。因为它们在肠道的炎症反应中能够分泌多种抗炎介质，又能释放神经介质，而且许多肥大细胞是和神经纤维紧邻的，刺激神经即可使肥大细胞活化。有实验对对56例符合罗马Ⅱ标准的IBS病人的肠黏膜活检组织进行了检测，发现IBS患者末端回肠黏膜内肥大细胞的数目(均值：10.98±2.96)比非IBS对照组的病人(6.05±0.51)明显增多(P<0.01)。在症状发作期间，其直肠黏膜内肥大细胞的活化比例(85%)较非IBS对照组(15%)明显为高。

空肠弯曲杆菌C.jejuni是一种革兰氏阴性菌，与小肠结肠炎有关，局部急性炎症反应，参与肠组织的损伤和腹泻。其毒素CjCDT可以调节宿主肠道上皮细胞炎症反应，诱导肠上皮细胞释放IL-8，而CDT的抗体具有中和并刺激IL-8的释放能力。CDT感染人结肠上皮细胞致使NF-κΒ的激活和Toll样受体(TLR)信号并且转录因子NF-κΒ激活大量的促炎细胞因子的基因，包括IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-α。CjCDT能够刺激肠上皮细胞产生IL-8，其可促进嗜中性粒细胞迁移和在肠组织炎症反应。CDT是多种革兰氏阴性致病菌的毒力因子。完整的CDT是由3个不同亚基组成的三聚体，即cdtA、cdtB及cdtC。对其它细菌的CDT的研究表明cdtB亚基是CDT毒素的活性中心，具有I型脱氧核糖核酸酶(DNaseI)活性，可以破坏真核细胞的染色体DNA，进而诱导多种哺乳动物细胞凋亡；可以抑制上皮细胞增殖，并诱导其凋亡，破坏机体黏膜组织，从而有助于细菌侵入机体；可以抑制宿主免疫细胞的增殖，导致局部的免疫抑制。在大鼠空肠弯曲杆菌感染实验中表示敲除cdtB基因的空肠弯曲杆菌感染实验组相比野生基因型的空肠弯曲杆菌感染对照组IBS表现型出现显著减少。因此cdtB会直接及间接通过抗体刺激肠黏膜内多种免疫细胞，间歇性刺激引发不必要的过度免疫-神经反应；进而可能是导致肠易激综合症发病的重要因素。