[发明专利]10-去乙酰巴卡亭III 10β-O-乙酰转移酶突变体及其在催化合成紫杉醇及其类似物中的应用

权利要求书

1.一种10-去乙酰巴卡亭III 10β-O-乙酰转移酶DBAT的突变体蛋白，其特征在于，所述的突变体蛋白与氨基酸序列如SEQ ID NO 1所示的野生型蛋白DBAT相比，具有G38R氨基酸突变；

所述的突变体蛋白的氨基酸序列选自SEQ ID NO 2以及SEQ ID NO 15～SEQ ID NO 23所示的氨基酸序列。

2.一种编码权利要求1所述突变体蛋白的核苷酸。

3.根据权利要求2的核苷酸，其特征在于，所述的核苷酸选自SEQ ID NO 25以及SEQ IDNO 38～SEQ ID NO 46所示的核苷酸。

4.一种含有权利要求2-3任一项所述的核苷酸的重组质粒。

5.一种含有权利要求2-3任一项所述的核苷酸或权利要求4所述的重组质粒的重组细胞,该重组细胞为非植物细胞。

6.权利要求1所述的突变体蛋白或权利要求2-3任一项所述的核苷酸或权利要求4所述的重组质粒或权利要求5所述的重组细胞在催化10-去乙酰紫杉醇及其类似物的C10位羟基酰基化生成紫杉醇或其类似物中的应用。

7.根据权利要求6的应用，其特征在于，所述的突变体蛋白与能够专一性水解7-木糖-10-去乙酰紫杉烷的糖基水解酶相偶联，以7-木糖-10-去乙酰紫杉烷为底物，以酰基辅酶A为酰基供体生成紫杉醇或其类似物。

8.根据权利要求7的应用，其特征在于，所述的酰基受体为10-去乙酰紫杉醇、10-去乙酰巴卡亭III；所述的酰基供体为乙酰辅酶A、丙酰辅酶A和丁酰辅酶A。

9.一种酶促反应偶联体系，其特征在于，所述的酶促反应偶联体系是由权利要求1的突变体蛋白与糖基水解酶系列蛋白相偶联形成的，所述的糖基水解酶系列蛋白为克隆自香菇的LXYL-P1蛋白；所述的偶联形式为：两种酶在同一反应体系中各自独立存在、或通过连接子形成的融合蛋白形式。

10.根据权利要求9的应用，其特征在于，所述的糖基水解酶为LXYL-P1-1或LXYL-P1-2。