[发明专利]一种制备4-雄烯二酮的方法

权利要求书

1.一种4-雄烯二酮的制备方法，其特征在于，所述方法包括：

1)菌种繁殖，所述菌种为Mycobacterium sp.NRRLB-3805；

2)将底物植物甾醇与植物油、乳化剂，在发酵罐中混合后升温到100-120℃乳化，并将乳化后的溶液与适量的水、培养基混合后灭菌得到发酵培养基；所述发酵培养基为：玉米浆干粉25g/L，黄豆饼粉20g/L，磷酸二氢钾3g/L，硫酸镁0.5g/L，硫酸亚铁0.05g/L，植物甾醇100g/L，乳化剂5g/L，植物油80g/L，泡敌2g/L，pH值8.0；

3)将步骤1)繁殖后的菌种接入到步骤2)得到的发酵培养基中进行发酵培养，发酵培养的发酵条件为：

温度30±1℃，罐压0.04-0.06MPa，搅拌转速100rpm，通气比为0.3-0.5，发酵过程中利用磷酸或者氨水控制pH7.2±0.2，当植物甾醇剩余量低于5％时放罐；发酵周期为180±20h；

4)由经过步骤3)发酵的培养基中提取4-雄烯二酮。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤1)所述的菌种繁殖是通过下述步骤实现的：

a)一级种子罐培养，培养40小时使一级种子罐中的菌种浓度达到5g每100ml发酵液以上；所述一级种子罐的培养基配方为：葡萄糖6-10g/L，甘油6-10g/L，硝酸钠4-6g/L，磷酸氢二铵0.4-0.8g/L，以去离子水定容至所需体积并调节pH值至7.5；

b)将步骤a)培养的菌种以10-20％的接种量接种到二级种子罐中，培养30小时，至二级种子罐中的菌种浓度达到10％以上；所述二级种子罐的培养基配方为：葡萄糖6-10g/L，甘油6-10g/L，硝酸钠4-6g/L，磷酸氢二铵0.4-0.8g/L，以去离子水定容至所需体积并调节pH值至7.5。

3.如权利要求2所述的方法，其特征在于，所述菌种浓度的检测方法为取10ml发酵液在离心机上10000g的条件下离心10分钟，测沉淀湿重，并计算所述沉淀湿重与所述10ml发酵液的比值。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳化剂选自吐温60、吐温80、司盘60、曲拉通X-100、卵磷脂。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述植物油选自玉米油、瓜子油、菜籽油、豆油。