[发明专利]检测水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的RT‑PCR及其应用有效
| 申请号： | 201610363054.3 | 申请日： | 2016-05-26 |
| 公开（公告）号： | CN107130057B | 公开（公告）日： | 2018-02-09 |
| 发明（设计）人： | 周羽;王振华;李新海;翁建峰;邸宏;张泓;祖洪月;张晓明 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11;C12R1/94 |
| 代理公司： | 北京路浩知识产权代理有限公司11002 | 代理人： | 王文君 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 水稻 黑条矮缩 病毒 南方 rt pcr 及其 应用 | ||
1.一种遗传标记物在鉴别水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒中的应用，所述遗传标记物来源于水稻黑条矮缩病毒基因组，其核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示。
2.用于检测水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的特异性引物组合，其特征在于，用于检测水稻黑条矮缩病毒的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-2所示，用于检测南方水稻黑条矮缩病毒的引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.3-4所示。
3.权利要求2所述的特异性引物组合在检测南方水稻黑条矮缩病毒和水稻黑条矮缩病毒中的应用。
4.含有权利要求2所述特异性引物组合的检测试剂盒。
5.一种检测水稻黑条矮缩病毒和南方水稻黑条矮缩病毒的方法，其特征在于，对待测样本提取基因组RNA后反转录cDNA以其为模板，利用SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4所示的特异性引物对分别进行RT-PCR，检测待测样本中的水稻黑条矮缩病毒或南方水稻黑条矮缩病毒。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，
当待测样本中含有水稻黑条矮缩病毒时，采用SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2引物对的RT-PCR扩增产物片段大小为420 bp左右，而SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4引物对的PCR无扩增；
当待测样本中含有南方水稻黑条矮缩病毒时，采用SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4引物对的RT-PCR扩增产物片段大小为403bp左右，而SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2引物对的PCR无扩增。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述RT-PCR的反应条件为预变性95℃ 5min；95℃ 30sec，55℃ 30sec，68℃ 60sec,共35个循环；68℃ 10min，12℃保存。
8.如权利要求5-7任一所述的方法，其特征在于，所述待测样本为玉米、水稻或小麦。
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