[发明专利]一种辛可耐因Ib的制备方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种辛可耐因Ib的制备方法，以及辛可耐因Ib在制备用于防治糖尿病及其血管并发症的药物中的应用。

背景技术

糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所致的以高血糖为特征的代谢性疾病。最近的流行病调查证实，我国的糖尿病患病率高达11.6％，在糖尿病人口绝对数方面已成为全球之冠。此外，据世界卫生组织统计，糖尿病并发症高达100多种，是目前已知并发症最多的一种疾病。而糖尿病的危害主要来自糖尿病血管并发症，长期血糖增高会诱发大血管、微血管受损并危及心、脑、肾、周围神经、眼睛、足等。因此对糖尿病血管并发症的防治研究极为迫切。糖尿病个体体内蛋白质发生非酶糖基化致使非酶糖基化代谢产物增多，是导致糖尿病血管并发症的重要原因之一。非酶糖基化代谢产物增多，可引发心肌细胞代谢紊乱、心肌细胞钙转运缺陷，导致心肌细胞功能异常；同时，非酶糖基化代谢产物能使肾小球合成Ⅳ型胶原，内皮、系膜和平滑肌细胞增殖。因此，糖尿病高糖状态下非酶糖基化代谢产物过多是糖尿病心肌疾病和糖尿病肾病等糖尿病并发症的发生和发展的共同诱因之一。

自由基清除剂可以显著抑制非酶糖基化代谢产物的形成，糖尿病时增强的氧化应激可以加速非酶糖基化代谢产物的形成，进而促进糖尿病血管并发症的发展。因此，抑制非酶糖基化反应，降低非酶糖基化代谢产物生成是防治糖尿病血管并发症的重要策略。

辛可耐因Ib是一种具有抗氧化作用的化合物，最早在蔷薇科植物枇杷中分离获得，后来陆续在蔷薇科枇杷属的山茶和红树科的秋茄以及菝契科粗茎菝契等植物中被发现。辛可耐因Ib是一种黄烷3-醇类的鞣质类成分，结构式如式Ⅰ所示。该化合物是通过C3-C6连接构成，显著区别于通过C4-C8或者C4-C6的连接方式构成的原花青素类成分。该化合物具有很强的抗氧化作用，可有效清除DPPH自由基。目前尚没有关于辛可耐因Ib如何在植物中高效提取的记载，也没有将其应用在药物中的报道。

发明内容

本发明的发明人意外地发现了辛可耐因Ib存在于苹果的果实中，并且在进一步的研究中发现辛可耐因Ib能够降低大鼠的血糖浓度，同时能够抑制糖尿病大鼠体内非酶糖基化反应。因而，本发明的目的在于提供一种辛可耐因Ib的制备方法，同时还提供了辛可耐因在制备用于防治糖尿病及糖尿病血管并发症的药物中的应用。

一种辛可耐因Ib的制备方法，所述方法包括：

1)提供粗提物，常温下将所述粗提物溶于水中得到粗提物水溶液；其中，所述粗提物为植物的根、果实、茎和/或叶的醇提物，所述植物选自蔷薇科植物、红树科植物、葡萄科葡萄属植物和菝契科植物中的一种或多种；优选地，将所述粗提物以质量比1：10的比例溶于水中；

2)将所述粗提物水溶液经HP20型大孔树脂吸附，然后以乙醇水溶液梯度洗脱，收集富含辛可耐因Ib的洗脱液，合并所述洗脱液，减压浓缩，得辛可耐因Ib的初级富集物；

3)将步骤2)得到的初级富集物溶于等质量的甲醇，得到初级富集物的甲醇溶液，将所述初级富集物的甲醇溶液与60～100目的硅胶粉混合，减压拌样至干，干法上样，以二氯甲烷-甲醇为洗脱液过硅胶色谱柱梯度洗脱分离，收集并合并富含辛可耐因Ib的洗脱液，减压浓缩至干，得辛可耐因Ib的次级富集物；其中，所述硅胶粉的质量为所述初级富集物质量的1.5～2.5倍；所述硅胶色谱柱中硅胶质量为所述初级富集物质量的10～20倍；

4)将所述次级富集物溶解于2倍质量的水中得到次级富集物的水溶液，将所述次级富集物的水溶液以甲醇水溶液为梯度洗脱液通过大孔聚合物填料色谱柱分离，收集并合并富含辛可耐因Ib的洗脱液，减压浓缩至干，得辛可耐因Ib的三级富集物；优选地，所述大孔聚合物填料色谱柱为Toyopearl HW-40柱；

5)将4)得到的三级富集物以50％甲醇水溶液为洗脱液通过C18柱精制，在254nm检测收集辛可耐因Ib的色谱峰，收集洗脱液，减压浓缩，冷冻干燥得到辛可耐因Ib；优选地，所述C18柱为Cosmosil ODS柱。

在根据本发明的一个实施方案中，所述蔷薇科植物为蔷薇科苹果属植物。

在根据本发明的一个实施方案中，所述粗提物为苹果多酚。

在根据本发明的一个实施方案中，步骤2)中梯度洗脱的顺序为水、体积百分比浓度分别为10％、30％、50％、70％、95％的乙醇水溶液；优选地，每半个柱床体积作为一个接收体积检测洗脱样品。