[发明专利]一种褐色喜热裂孢菌发酵生产几丁质酶的方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程领域，特别涉及一种褐色喜热裂孢菌发酵生产几丁质 酶的方法。

背景技术

几丁质酶(Chitinase，EC3.2.1.14)是一种广泛存在于动物、植物和微生物 中的酶，几丁质酶能催化分解几丁质，产生几丁寡糖和几丁二糖。几丁质酶的 水解产物低聚糖有抗菌作用,可以调节生物体的免疫力，还可以抑制肿瘤细胞的 生长等。几丁质酶对植物真菌病害的防治也有作用。因此，几丁质酶在食品、 医药、农业以及化妆品等行业具有独特的使用价值。

由于微生物几丁质酶比动植物几丁质酶催化作用的pH值和温度范围更 宽，且制备相对更容易，所以目前国内外获得几丁质酶的方法主要是微生物发 酵法。很多微生物都有产生几丁质酶的能力，但是具有高产耐高温几丁质酶能 力的不多。从土壤中分离菌株是菌种选育的重要途径。从自然界土样中筛选出 有较高产酶耐高温能力的菌株，并提高其产酶能力，这在发酵工业菌种选育上 具有卓越的成就，迄今国内外发酵工业中所使用的生产菌株大部分是从土壤中 选育出来的。

利用微生物生产几丁质酶过程中发酵条件对于微生物产几丁质酶十分重 要，微生物产几丁质酶发酵除受温度、pH、溶氧、培养时间影响外，其产量 深受培养基组分影响。

发明内容

本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较 佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或 省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略 不能用于限制本发明的范围。

鉴于上述和/或现有酶基因工程和酶工程领域中存在的问题，提出了本发 明。

因此，本发明的目的是提供一种褐色喜热裂孢菌发酵生产几丁质酶的方 法，以填补微生物生产几丁质酶的技术空白，生产出的几丁质酶具有耐高温特 性以及具有较大的pH耐受范围。

为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种褐色喜热裂孢菌 发酵生产几丁质酶的方法，其特征在于，包括，将所述褐色喜热裂孢菌在加富 培养基中50～55℃、200～240r/min条件下培养20～24h，制得一级种子液；以 2～3％的接种量将一级种子液转接在加富培养基中，在50～55℃、200～240r/min 条件下培养20～24h制得二级种子液；以2～3％的接种量将二级种子液接入发酵 培养基中，在50～55℃、200～240r/min条件下培养50～54h，得到几丁质酶产 品。

作为本发明所述褐色喜热裂孢菌发酵生产几丁质酶的方法的一种优选方 案，其中：所述加富培养基以质量百分比计，包括，NaCl1.00～1.40％、(NH₄) ₂SO₄2.40～2.60％、KH₂PO₄0.65～0.80％、Na₂HPO₄7.00～7.50％、EDTA0.01～0.03％、 MgSO₄·7H₂O0.05～0.10％、FeSO₄·7H₂O0.005～0.010％、MnSO₄· 7H₂O0.005～0.007％、CaCl₂·2H₂O0.003～0.007％、生物素0.00007～0.00010％、硫 铵素0.00007～0.00010％、酵母粉0.010～0.020％。

作为本发明所述褐色喜热裂孢菌发酵生产几丁质酶的方法的一种优选方 案，其中：所述加富培养基，其碳源包括纤维二糖、葡萄糖或木聚糖中的一种 或几种。

作为本发明所述褐色喜热裂孢菌发酵生产几丁质酶的方法的一种优选方 案，其中：所述加富培养基，其pH为6.0～8.0。