[发明专利]一种PtCu@g‑C3N4/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法及应用

权利要求书

1.一种PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）取6 µL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的纳米金硫堇修饰的还原石墨烯滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6 µL、8.0 ~ 12.0 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；滴加6 µL、1 fg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中干燥；

（5）将6 µL、2.0 ~ 3.0 mg/mL的PtCu@g-C₃N₄/rGO-Ab₂检测抗体孵化物溶液，滴涂于电极表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一种PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器。

2.如权利要求1所述的一种PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法，所述PtCu@g-C₃N₄/rGO-Ab₂检测抗体孵化物溶液的制备，包括以下步骤：

（1）g-C₃N₄/rGO的合成

称取120 ~ 130 mg GO和190 ~ 210 mg g-C₃N₄加入到100 mL超纯水中，超声溶解；将1.5 ~ 2.5 mL聚二烯丙基二甲基氯化铵PDDA加入到上述溶液，超声分散30 min，再加入1 ~ 2 mL水合肼，90 ℃下反应24 h，离心分离，依次用超纯水、无水乙醇洗涤三次，得到g-C₃N₄/rGO；

（2）PtCu@g-C₃N₄/rGO标记物的合成

0.015 ~ 0.025 g 聚乙烯吡咯烷酮溶于40 mL水中，与5 ~ 7 mL、6.75 mg/mL的g-C₃N₄/rGO混合，超声30 min，再依次加入3 mL、18.8 mmol/mL的CuSO₄； 2.7 mL、10 mmol/mL 的H₂PtCl₆·6H₂O； 5 mL、2.64 mol/L的硼氢化钠，室温下搅拌12 h，离心分离，超纯水洗涤三次，35 ℃下真空干燥12 h，制得PtCu@g-C₃N₄/rGO检测抗体标记物；

（3）PtCu@g-C₃N₄/rGO-Ab₂检测抗体孵化物溶液的制备

将4 mg的PtCu@g-C₃N₄/rGO检测抗体标记物分散到1 mL pH 7.4磷酸盐缓冲溶液，加入1 mL 20 µg/mL的肿瘤标志物检测抗体Ab₂溶液，4 ℃恒温振荡培养箱中振荡孵化12 h，制得PtCu@g-C₃N₄/rGO-Ab₂检测抗体孵化物溶液，4 ℃下保存备用。