[发明专利]一种PtCu@g‑C3N4/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法及应用

说明书

技术领域

本发明属于新型功能纳米材料、免疫分析和生物传感技术领域，提供了一种PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法及应用。

背景技术

肿瘤的发病率高，不易察觉，我国病例数相当庞大，对人类的健康产生极大危害。肿瘤标志物是肿瘤细胞产生和释放的以抗原、酶、激素等形式的代谢产物存在于肿瘤细胞内或宿主体液中，其在临床上对于原发肿瘤的发现，肿瘤高危人群的筛选、良性和恶性肿瘤的鉴别诊断、肿瘤发展程度的判断，肿瘤的治疗效果的观察和评价及肿瘤复发和预后的预测产生极大的影响，引起人们的广泛关注。

CA724、CA242、CEA等常见的胰腺癌肿瘤标志物，对于胰腺癌的诊断都能起到一定的作用。夹心型电化学免疫传感器结合了高特异性的免疫分析技术和高灵敏的电化学分析技术，具有灵敏度高、制备简单、检测快速、成本低等优点，在临床检验、环境监测、食品安全控制、生物监测等领域都有重要的应用价值。

氧化石墨烯表面有大量的羧基官能团，使得它更容易与有机物结合。且具有大的比表面积，良好的电子传递能力和催化性能，能有效固载抗体。g-C₃N₄作为一种非金属半导体材料，由于其独特的结构特性、比表面积高、化学稳定性好、热稳定性好、同时具有最小的能带隙宽度，环保无不良和毒性作用，作为一个不含金属的催化剂具有良好的生物相容性。g-C₃N₄和rGO的耦合能显著提高g-C₃N₄/rGO合成材料的比表面积和导电率、增加其生物相容性。将PtCu合金杂化到g-C₃N₄/rGO，大大提高了材料的热稳定性，导电性，催化性。

发明内容

本发明提供了一种PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法及应用，实现了对肿瘤标志物的超灵敏检测。

本发明的目的之一是提供一种PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法。

本发明的目的之二是将所制备的PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器，用于检测肿瘤标志物。

本发明的技术方案，包括以下步骤

1. 一种PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器的制备方法，包括以下步骤：

（1）将直径为4 mm的玻碳电极用Al₂O₃抛光粉打磨，超纯水清洗干净；

（2）取6 µL、1.0 ~ 2.0 mg/mL的纳米金硫堇修饰的还原石墨烯滴加到电极表面，室温下晾干，用超纯水冲洗电极表面，晾干；

（3）继续将6 µL、8.0 ~ 12.0 µg/mL的肿瘤标志物捕获抗体Ab₁滴加到电极表面，超纯水冲洗，4 ℃冰箱中干燥；

（4）继续将3 µL、1.0 ~ 3.0 mg/mL的BSA溶液滴加到电极表面，用以封闭电极表面上非特异性活性位点，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中晾干；滴加6 µL、1 fg/mL ~ 10 ng/mL的一系列不同浓度的肿瘤标志物抗原Ag溶液，超纯水冲洗电极表面，4 ℃冰箱中干燥；

（5）将6 µL、2.0 ~ 3.0 mg/mL的PtCu@g-C₃N₄/rGO-Ab₂检测抗体孵化物溶液，滴涂于电极表面上，置于4 ℃冰箱中晾干，制得一种PtCu@g-C₃N₄/rGO标记的电化学免疫传感器。

PtCu@g-C₃N₄/rGO-Ab₂检测抗体孵化物溶液的制备，包括以下步骤：

（1）g-C₃N₄/rGO的合成