[发明专利]乳酸菌基础培养基、制备方法及分离和纯化方法

说明书

技术领域

本申请涉及一种乳酸菌基础培养基、制备方法及分离和纯化方法。

背景技术

乳酸菌指发酵糖类主要产物为乳酸的一类无芽孢、革兰氏染色阳性细菌的总称，生长于厌氧或者兼性厌氧环境中。乳酸菌只是一种习惯叫法，并不是微生物分类学上的名称。这是一群相当庞杂的细菌，分类有数百个属，很难把是否产生乳酸作为细菌的分类标准。乳酸菌细胞形态有球状、类球状、杆状或短杆状等。目前研究表明，乳酸菌除个别属对人、畜致病，绝大多数对人畜无害，而革兰氏阳性乳酸菌占据了绝大多数，如目前大量应用的乳杆菌属、片球菌属、明串珠菌属、乳球菌属、双歧杆菌属、肠球菌属等都为革兰氏阳性。大量的研究表明，这类乳酸菌在动物体内可以降低pH值，降解氨、吲哚、粪臭素等有害物质，增强机体的免疫功能，产生抑菌代谢产物，如乳酸菌肽、细菌素、乳酸、过氧化氢、乙酸等，从而阻止和抑制致病菌的侵入和定植，维持肠道中正常的微生态平衡，提高机体的抗病能力，对许多革兰氏阳性菌(G+)及革兰氏阴性菌(G-)有强烈的抑制作用，可抑制肠道内腐败菌的生长繁殖和腐败产物的产生。

发明内容

本发明的目的在于提供一种乳酸菌基础培养基、制备方法及分离和纯化方法，以克服现有技术中的不足。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本申请实施例公开一种乳酸菌基础培养基，以水1000mL作为相对量，其他原料包括：

蛋白胨 5～7g；

胰酶解酪阮 4～5g；

酵母提取物 8～9g；

琼脂 18～20g；

盐溶液 34～41mL。

优选的，在上述的乳酸菌基础培养基中，所述盐溶液包括：无水氯化钙0.2g，硫酸镁0.48g，磷酸氢二钾1g，磷酸二氢钾1g，碳酸氢钠10g，氯化钠2g。

优选的，在上述的乳酸菌基础培养基中，所述盐溶液的制备方法：将氯化钙和硫酸镁溶解到300mL水中，再加500mL水，搅拌过程中加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、碳酸氢钠和氯化钠，直至全部溶解，继续加入200mL水。

本申请还公开了一种乳酸菌基础培养基的制备方法，包括步骤：

(1)按照配方称取各组分，将蛋白胨，胰酶解酪阮，酵母提取物、琼脂混合，加入盐溶液，调节pH至5.7～6.1，121℃灭菌15分钟；

(2)将多粘菌素、萘啶酮酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸-HCl溶于水中，过滤灭菌；

(3)将步骤1灭菌后的混合物冷却至50℃，同步骤(2)得到的溶液及预先配好的复合酸碱指示剂混合在一起混匀。

本申请还公开了一种培养基分离和纯化方法，其特征在于：乳酸菌的分离采用平板稀释法，对分离获得的菌株采用平板划线法。

与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明的乳酸菌筛选培养基相对于常规的分离乳酸菌的培养基，更有利于区分乳酸菌目标菌，加强了对杂菌生长的抑制，提高了乳酸菌的筛选效率。

具体实施方式

本发明通过下列实施例作进一步说明：根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料 比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。

实施例1

乳酸菌基础培养基：蛋白胨5g，胰酶解酪阮4g，酵母提取物8g，琼脂20g，盐溶液40mL，水1000mL。

盐溶液包括：无水氯化钙0.2g，硫酸镁0.48g，磷酸氢二钾1g，磷酸二氢钾1g，碳酸氢钠10g，氯化钠2g。

盐溶液的制备方法：将氯化钙和硫酸镁溶解到300mL水中，再加500mL水，搅拌过程中加入磷酸氢二钾、磷酸二氢钾、碳酸氢钠和氯化钠，直至全部溶解，继续加入200mL水。

培养基按如下步骤配制：

(1)按照配方称取各组分，将蛋白胨，胰酶解酪阮，酵母提取物、琼脂混合，加入盐溶液，调节pH至5.7，121℃灭菌15分钟；

(2)将多粘菌素、萘啶酮酸、抗坏血酸、L-半胱氨酸-HCl溶于水中，过滤灭菌；

(3)将步骤1灭菌后的混合物冷却至50℃，同步骤(2)得到的溶液及预先配好的复合酸碱指示剂混合在一起混匀。

利用上述培养基分离和纯化方法：

乳酸菌的分离采用平板稀释法，对分离获得的菌株采用平板划线法。

实施例2

乳酸菌基础培养基：蛋白胨7g，胰酶解酪阮4g，酵母提取物9g，琼脂20g，盐溶液41mL，水1000mL。