[发明专利]一种分子、表达其的细胞及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及肿瘤的细胞免疫治疗技术领域，具体地，涉及一种嵌合的免疫抑制检查点受体分子，编码其的核酸，含有该核酸的构建体、表达载体和转化的细胞，以及它们的制药用途。

背景技术

CAR-T细胞肿瘤治疗现状

2015年10月，国家癌症中心在著名癌症专业期刊《Cancer Letters》上首次发布我国居民癌症现患数据。结果显示，我国5年内诊断为癌症且仍存活的病例数约为749万(其中男性患者368万人，女性患者381万人)，总体5年癌症患病率为556/10万，数据从整体上反映了癌症病人对新治疗研究进展的迫切需求。

而免疫疗法已然成为人类对抗癌症新的希望，而CAR-T治疗血液肿瘤特别是B-ALL白血病的临床试验结果，使其成为了近年来最备受瞩目的肿瘤免疫疗法之一。然而靶向实体瘤的CAR T免疫治疗研究仍然面对巨大的考验：如何突破实体瘤组织壁垒、如何抵抗肿瘤组织内的免疫抑制、免疫细胞如何在缺氧微环境中竞争生存等。

肿瘤治疗的难题，特别是实体瘤及其肿瘤微环境中的免疫抑制作用

肿瘤微环境可下调肿瘤抗原特异性的辅助/毒性杀伤细胞的数数量和炎症因子的释放，上调免疫抑制细胞数量和抑制功能，如调节性T细胞(Regulatory T cells)和髓系来源的抑制细胞(Myeloid-Derived Suppressor Cells)，将正常免疫系统颠覆为促进肿瘤自身生长的优势因素。

针对肿瘤免疫抑制的相应措施现状

针对实体瘤免疫抑制的情况，科学家陆续研发出阻断抑制信号通路，下调肿瘤微 环境中的抑制性细胞的方法，如特异性靶向PD-1(Programmed Death 1)、PD-L1(Programmed Death Ligand 1)、CTLA4(Cytotoxic T-Lymphocyte-associated Antigen-4)抗体或抑制剂，免疫激活因子等。

在现有技术中，将免疫抑制相关抗原PD-1和CTLA-4应用于肿瘤免疫治疗的手段通常是构建PD-1抗体(Pembrolizumab、Nivolumab)或CTLA-4抗体(Ipilimumab)，或者使用PD-1或CTLA-4的抑制剂或信号通路阻断剂。然而，PD-1抗体和CTLA-4抗体存在一定的限制性，即，抗体需要渗入肿瘤组织中才可发挥疗效，所以抗体的临床应用具有不确定性。据报道，CAR-GD2T细胞联合PD-1抗体进行免疫治疗时，可抵抗肿瘤微环境的免疫抑制作用，加强CAR T细胞肿瘤杀伤。对于PD-1和CTLA-4的免疫治疗应用，现有技术中也报道了共表达靶向肿瘤相关抗原CAR T和抑制性CART(胞外抗原为正常细胞抗原，胞内段为PD-1或者CTLA-4的抑制信号域)，可防止CAR T脱靶现象的发生(脱靶现象：CAR T细胞识别杀伤正常细胞)。

另外，现有技术中还报道了共表达双抗体PD-1和CD19/Mesothelin/PSCA的CART，这虽然扩大了靶点范围(表达PD-1或CD19/Mesothelin/PSCA或同时表达两者的肿瘤细胞)，但是忽略了盲目增加细胞杀伤作用所引起的副作用：细胞因子风暴、脱靶现象(正常细胞也表达两个抗原或之一，导致CAR T杀伤正常细胞，引起正常细胞缺失的机体功能缺陷)。

发明内容

本发明的目的在于提供一种嵌合的免疫抑制检查点受体分子，编码其的核酸，含有该核酸的构建体、表达载体和转化的细胞，以及它们的制药用途。本发明的表达所述嵌合的免疫抑制检查点受体分子的转化的细胞可营造一种肿瘤免疫抑制微环境，具有增强的肿瘤杀伤作用；并且，该转化的细胞有自调节功能，可缓解过度的非特异免疫效应和细胞因子风暴等副作用。

本发明通过以下技术方案实现上述目的：

第一方面，本发明提供了一种嵌合的免疫抑制检查点受体分子，其包含胞外结构域、跨膜结构域和胞内结构域，其中，所述胞外结构域和任选地跨膜结构域为免疫抑制检查点受体分子的相应结构域或基于该结构域进行的基因改造，所述胞内结构域为一个或多个免疫激活信号结构域。

作为优选，所述免疫抑制检查点受体分子选自PD-1、CTLA-4、LAG3、TIM3、A2AR、B7H3、B7H4、BTLA、IDO、KIR、CD160、2B4(CD244)和VISTA(C10orf54)；