[发明专利]一种同时检测食品中氨基酸和生物胺的分析方法

权利要求书

1.一种同时检测食品中氨基酸和生物胺的分析方法，其特征在于：所述的氨基酸和生物胺在温和条件下与衍生试剂4’-碳酰氯-罗丹明发生原位衍生反应，得到的衍生化产物经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测；

具体包括以下步骤：

a. 超声辅助-原位衍生-分散液液微萃取：取10-100 µL标准品混合溶液或预处理的待测样品，10-30 µL内标物溶液、500-800 µL pH 8.0-10.0的 NaHCO₃-Na₂CO₃缓冲溶液，加入离心管中，注入60-200 µL萃取剂和200-300 µL 4’-碳酰氯-罗丹明-分散剂溶液，摇匀后密封，在温度10-60 ºC水浴中超声波振荡反应1-5分钟；离心分离，所得沉积相取出后用乙腈定容到200 µL，得氨基酸和生物胺衍生物萃取物溶液；

b. 将氨基酸和生物胺衍生物萃取物溶液经滤膜过滤后利用超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统进行分析检测；

所述4’-碳酰氯-罗丹明采用以下方法制备而成：将0.922 g 4’-羧基-罗丹明加入30 mL氯化亚砜，滴入0.1 mL N,N-二甲基甲酰胺，磁力搅拌，升温至50～80℃，反应5～6 h，减压蒸除氯化亚砜，冷却至室温，得紫色固体，用乙醚重结晶，得紫色针状晶体即为4’-碳酰氯-罗丹明;

所述内标物溶液为1×10^-5 mol/L 的1,7-二氨基庚烷的乙腈溶液；所述萃取剂为1-溴-3-甲基丁烷，溴代环己烷，1-溴代辛烷或溴苯；所述的分散剂为丙酮，乙腈，甲醇或乙醇；

所述氨基酸为酪氨酸(Tyr)，组氨酸，2-苯乙氨酸，色氨酸，赖氨酸，鸟氨酸，精氨酸，瓜氨酸；所述生物胺为酪胺，组胺，2-苯乙胺，色胺，尸胺，腐胺，胍基丁胺，亚精胺，精胺；

所述超高效液相色谱三重四极杆串联质谱系统中色谱分离使用安捷伦SB C18色谱柱：2.1 mm × 50 mm，1.8 µm，进样体积为2 µL，柱温30 ℃，采用梯度洗脱法；

所述梯度洗脱法，时间为10 min，流速为0.2 mL/min，流动相A为5%乙腈水溶液含有0.1%甲酸，流动相B为乙腈含有0.1%甲酸，0 min流动相组成为80%A+20%B，6 min时35%A+65%B，8.5 min时5%A+95%B，10 min时5%A+95%B；所述质谱的条件为：干燥气温度300℃，流速10 L/min，喷雾器气压40 psi，鞘气温度280℃，流速11 L/min，毛细管电压3.5 kV。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述待测样品为液体时采用的预处理方法为：将液体样品直接超声3 min后即可；所述待测样品为固体时采用的预处理方法为：将固体样品粉碎或匀浆后，每2 g固体样品中加入20 mL浓度为0.1 mol/L的盐酸，超声3 min后离心，取上清液即可。

3.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述萃取剂为溴苯；所述分散剂为乙腈。

4.根据权利要求1所述的分析方法，其特征在于，所述4’-碳酰氯-罗丹明-分散剂溶液的摩尔浓度为1×10^-2 mol/L。