[发明专利]一种产松柏醇的工程菌、构建方法及产松柏醇的用途

权利要求书

1.产松柏醇的工程菌的构建方法，其特征是包括如下步骤：

(1)全化学合成TAL、COMT、4CL和CCR基因，所述基因TAL、COMT、4CL和CCR的核苷酸序列依次用SEQ ID No.05，SEQ ID No.06，SEQ ID No.07，SEQ ID No.08所示；

(2)PCR克隆hpaBC、yahK、metK和pntAB基因；所述基因hpaBC、yahK、metK、pntAB的核苷酸序列依次用SEQ ID No.01，SEQ ID No.02，SEQ ID No.03，SEQ ID No.04所示；

(3)全化学合成以SEQ ID No.09所示的表达载体骨架pBPE001、以SEQ ID No.10所示的表达载体骨架pBPE002、以SEQ ID No.11所示的表达载体骨架pBPE003；

(4)将所述基因TAL、hpaBC、COMT与表达载体骨架pBPE001通过酶切连接方式进行连接，得到重组表达载体pTHM；将所述基因4CL、CCR、yahK与表达载体骨架pBPE002通过酶切连接方式进行连接，得到重组表达载体pLRH；将所述基因pntAB、metK与表达载体骨架pBPE003通过酶切连接的方式进行连接，得到重组表达载体pNAM；

(5)从大肠杆菌BL21(DE3)菌中克隆得到T7RNA聚合酶基因，通过λRed同源重组技术整合到SyBE-002447底盘菌株染色体上得到SyBE-002447(DE3)菌株；

(6)将重组表达载体pTHM、重组表达载体pLRH和重组表达载体pNAM转化到底盘菌株SyBE-002447(DE3)，对单克隆进行筛选，得到工程菌SyBE-CNF。

2.权利要求1的方法构建的产松柏醇的工程菌SyBE-CNF。

3.权利要求2的产松柏醇的工程菌发酵制备松柏醇的方法，其特征是包括如下步骤：将重组菌SyBE-CNF接种在LB培养基中，37℃，220rpm，震荡培养2-4h，在OD₆₀₀到达0.8-1.0之间时，转接到含有葡萄糖的M9培养基中，进行发酵，当葡萄糖浓度低于0.5g/L时，补加5g/L葡萄糖，持续合成松伯醇。