[发明专利]从鱼类的精液分离多脱氧核糖核苷酸的方法、由所述方法获得的多脱氧核糖核苷酸及其用途

权利要求书

1.一种从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，包括：

(1)将鱼类的精液进行第1次离心分离，获取包含精液细胞的沉淀物的步骤；

(2)将所述沉淀物添加于细胞溶解缓冲液，制造细胞溶解物后，使所述细胞溶解物消化的步骤；

(3)将经过所述(2)步骤的细胞溶解物进行第2次离心分离，获取上清液的步骤；

(4)在根据所述(3)步骤而获取的上清液中投入饱和氯化钠水溶液并混合后，进行第3次离心分离，获取包含DNA的上清液的步骤；

(5)在根据所述(4)步骤而获取的上清液中投入乙醇并使DNA沉淀后，收集所述沉淀的DNA并进行干燥的步骤；及

(6)用物理方法破碎根据所述(5)步骤而获得的DNA，获取PDRN的步骤。

2.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

所述鱼类为鲑鱼科鱼类。

3.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

所述鱼类为虹鳟鱼。

4.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

在所述(2)步骤中，所述细胞溶解缓冲液包括选自由Tris-HCl、NaCl及Na₂EDTA组成的组中的某一种或两种以上。

5.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

在所述(2)步骤中，所述细胞溶解物的消化使用十二烷基硫酸钠溶液、Na₂EDTA溶液及蛋白水解酶K溶液的混合溶液来执行。

6.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

在所述(2)步骤中，所述细胞溶解物的消化在30～39℃下执行12～20小时。

7.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

在所述(4)步骤中，所述上清液与所述饱和氯化钠水溶液的投入比率为2:1至1:2的重量比。

8.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

借助于分光光度计测量的根据所述(5)步骤而获取的DNA的纯度(260nm/280nm)为1.8～2.2。

9.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

还包括：将在所述(5)步骤中获得的干燥DNA溶解于去离子水后进行冻结干燥的步骤。

10.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

在所述(6)步骤中，所述物理方法为超声波分解法。

11.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

所述(6)步骤包括：

(i)将根据所述(5)步骤而获得的DNA溶解于选自由脱盐水、食盐水(0.9％NaCl)及磷酸盐缓冲食盐水组成的组中的某一种或两种以上的混合溶液，制造DNA溶液的步骤；及

(ii)将所述DNA溶液进行超声波分解的步骤。

12.根据权利要求11所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

所述DNA溶液的浓度为2～10mg/mL。

13.根据权利要求11所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

根据所述(i)步骤而制造的DNA溶液是在1～5℃下培养2～4小时后，进入所述(ii)步骤。

14.根据权利要求11所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，

所述超声波分解在以所述DNA溶液的浓度10mg/mL为基准时，在1～5℃下执行5～30分钟。

15.根据权利要求1所述的从鱼类的精液分离PDRN的方法，其特征在于，还包括：

将根据所述(6)步骤而获得的PDRN通过精密过滤膜进行过滤的步骤；

将通过所述过滤膜的PDRN进行冻结干燥的步骤；及

将所述冻结干燥的PDRN溶解于食盐水的步骤。

16.一种根据权利要求1至15中任一项所述的方法从鱼类的精液分离的PDRN。

17.一种利用权利要求16所述的PDRN制造的医药品或化妆品。